V5-Tag（竞争法）快速检测卡
V5标签蛋白快速检测专用 · 10-15分钟出结果 · 竞争法高特异性
产品概述
V5-Tag（竞争法）快速检测卡采用胶体金侧向层析技术，基于竞争免疫检测原理开发而成。检测卡的层析膜上固定有V5-Tag重组蛋白作为检测线，以及金标抗体的二抗作为质控线；金标垫上则包被了胶体金标记的抗V5-Tag单克隆抗体。
当样品中不含V5-Tag蛋白时，金标抗体可自由移动至检测线并与固定的V5-Tag蛋白结合，形成清晰的紫红色条带；当样品中含有V5-Tag蛋白时，目标蛋白会优先与金标抗体结合，占据抗体的结合位点，从而阻止金标抗体与检测线上的蛋白结合。样品中V5-Tag蛋白浓度越高，检测线显色越浅，当浓度达到18μg/mL以上时，检测线将完全不显色。本产品检测下限为2μg/mL，在2μg/mL至18μg/mL范围内，检测线颜色深浅与蛋白浓度呈负相关。
核心优势
与传统方法的时间对比
使用本产品可将蛋白检测时间从1天缩短至仅需15分钟！
产品信息
| 货号 | 规格 | 保存条件 | 保质期 |
|---|---|---|---|
| RA10087 | 10T | 常温干燥 | 12个月 |
| RA10087 | 100T | 常温干燥 | 12个月 |
组成成分：独立铝箔袋包装的V5-Tag检测卡、滴瓶装层析液、详细产品说明书
广泛应用场景
- 重组蛋白表达克隆筛选：快速鉴定大量转化子中的高表达阳性克隆，避免在低表达克隆上浪费时间和试剂
- 表达条件优化实验：快速比较不同诱导温度、诱导时长、诱导剂浓度对蛋白表达量的影响
- 蛋白纯化过程追踪：实时监测上样液、穿透液、洗脱液和收集液中的目标蛋白含量
- 真核细胞转染效率检测：快速评估不同转染试剂和转染方法对目的蛋白表达的影响
- 蛋白样品质量验证：快速确认蛋白样品中标签的完整性，为后续功能实验提供质量保障
- 大规模生产质控：适用于重组蛋白药物、工业酶制剂等生产过程中的中间产物快速检测
操作流程
- 准备工作：从密封铝箔袋中取出检测卡，水平放置于干燥的实验台面上；根据样品预期浓度进行适当稀释，确保待测蛋白浓度处于2-18μg/mL的最佳检测区间
- 样品加载：使用微量移液器准确吸取20μl稀释后的待测样品，缓慢滴加到检测卡的样品孔中
- 层析启动：立即向样品孔中滴加50μl配套层析液（滴瓶垂直滴加约2滴）
- 结果判读：室温下静置10-15分钟后观察并记录结果，超过20分钟后观察到的结果不具有参考价值
样品稀释指南：对于浓度已知的样品，直接稀释至约6μg/mL即可；对于浓度未知的细菌裂解液样品，建议先进行20倍稀释；对于哺乳动物细胞上清或裂解液样品，建议先进行4倍稀释。如果初次检测结果显示检测线显色极弱或无显色，且预期蛋白表达量较高时，应将样品进一步稀释10倍后重新检测。
低丰度蛋白检测提示：对于表达丰度极低的样品，可直接使用未经稀释的样本原液进行检测，但必须同时设置相同基质的阴性对照，通过比较检测线显色强度的差异来判断结果。
结果判读
质控线(C)和检测线(T)同时出现紫红色条带，且检测线显色强度与阴性对照一致，表明样品中不含V5-Tag蛋白或其浓度低于2μg/mL的检测下限。
质控线(C)显色，检测线(T)不显色或显色强度明显弱于阴性对照，表明样品中含有V5-Tag蛋白。检测线颜色越浅，代表蛋白浓度越高。
质控线(C)未出现紫红色条带，无论检测线(T)是否显色，均表明本次检测无效。可能原因包括试剂失效、操作不当或层析液滴加不足。
常见试剂兼容性
本产品对多种实验室常用缓冲液成分具有良好的耐受性，可直接检测大多数常规制备的蛋白样品，无需进行额外的样品处理。
| 试剂名称 | 浓度上限 |
|---|---|
| NaCl | 1.5M |
| KCl | 1.5M |
| Urea | 0.4M |
| Triton X-100 | 1% |
| Tween-20 | 1% |
| 试剂名称 | 浓度上限 |
|---|---|
| NP-40 | 1% |
| CHAPS | 1.0% |
| SDS | 0.20% |
| EDTA | 7.5mM |
| 甘油 | 10% |
特别提示：本产品可完全兼容100%浓度的RIPA裂解液，使用RIPA裂解液制备的细胞样品可直接进行检测，无需进行透析或其他处理步骤。
注意事项
- 本产品仅用于科学研究目的，严禁应用于人体临床诊断或治疗。
- 检测卡一旦从铝箔袋中取出，应在1小时内完成使用，长时间暴露在空气中可能导致试剂受潮失效。
- 正确的样品稀释是获得准确检测结果的关键，务必根据样品的预期浓度选择合适的稀释倍数。
- 竞争法检测结果判读必须设置阴性对照，通过与阴性对照的显色强度对比来判断结果。
- 当检测线显色异常微弱且与预期表达水平不符时，应考虑样品浓度过高的可能性，需进一步稀释样品后重新检测。
- 请严格按照说明书规定的时间判读结果，过早或过晚判读都可能导致错误的结论。
- 不同生产批次的产品可能存在微小的性能差异，请勿混合使用不同批次的检测卡和层析液。
- 实验过程中产生的所有废弃物应按照实验室生物安全管理规定进行分类处理。
常见问题及解决
| 现象 | 可能的原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 检测线与阴性对照相比无明显显色削弱 | 样品中不含目标蛋白 样品浓度低于检测下限 |
确认表达载体和检测卡匹配 使用原液进行检测并设置阴性对照 |
| 检测线显色非常浅或完全不显色 | 样品浓度高于工作浓度范围上限 样品浓度过高导致完全竞争 |
对样品进行更高倍数稀释后重新检测 |
| 质控线无可见条带 | 操作步骤有误 检测卡已过有效期 检测卡保存不当受潮 层析液滴加量不足 |
严格按照说明书重新操作 更换有效期内的新检测卡 确保检测卡于常温干燥处保存 滴加足量层析液(约2滴) |
