mIHC多重荧光免疫组化TSA试剂盒

mIHC多重荧光免疫组化TSA试剂盒

在生物医学研究与临床诊断领域，精准捕捉生物样本中蛋白质的表达水平与空间分布，是解析疾病机制、优化诊疗方案的关键前提。传统免疫组化技术虽为基础检测手段，但在低丰度靶点检测、多靶点同步分析等场景中，常面临信号微弱、特异性不足、标记数量受限等挑战。TSA（Tyramide signal amplification，酪胺信号放大）技术凭借独特的酶促信号放大机制，突破了传统技术的瓶颈，而基于该技术开发的 TSA 试剂盒，更将复杂的技术原理转化为标准化、易操作的实验工具，让高灵敏度、高特异性的多色荧光检测走进普通实验室。从石蜡切片、冷冻组织到细胞样本、类器官，TSA 试剂盒以广泛的样本适配性、稳定的检测性能，在空间蛋白组学研究、肿瘤免疫微环境分析、临床病理精准诊断等领域发挥着不可替代的作用。

本公司开发的TSA 试剂盒拥有国内外最全的产品组分，包括 TSA 标记荧光素、TSA 稀释液、3% H₂O₂、封闭液、一抗稀释液、抗体洗脱剂、HRP - 山羊抗兔 / 鼠 IgG、DAPI 染液及抗荧光淬灭封片剂，为用户提供一站式实验解决方案，极大提升实验便利性。其配备的 7 色荧光底物覆盖 480–750 nm 波长范围，可按需自由搭配，实现单张切片 7 重信息的同步获取。同时配套的二抗兼容兔 / 鼠多物种一抗，打破传统种属限制，搭配针对性研发的温和抗体洗脱剂，能在去除抗体的同时保留抗原与荧光信号，循环染色 5–7 轮仍可维持组织结构完整，相较于微波热修复大幅降低样本损伤。作为通用型试剂盒，其适用范围广泛，可适配石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片、类器官等多种组织样本，且依托专业的技术支持与质量保障体系，用户在使用过程中遇到的各类问题均能获得及时有效的解决方案。

表 1. 用于多重免疫组化检测的样本荧光染料

表2. TSA全套试剂盒配套组分

试剂盒操作流程（以石蜡切片为例）：

1. 脱蜡：将切片依次浸泡于二甲苯1（15min）、二甲苯2（15min）、无水乙醇1（5min）、无水乙醇2（5min）、 95%乙醇（5min）、 85%乙醇（5min）、 75%乙醇（5min），最后用水漂洗片子。

2. 抗原修复：抗原修复通常使用1×柠檬酸（PH6.0）作为修复液，高温高压修复，将切片至于高压锅中，加入适量的修复液，关上高压锅，待上汽后计时 2min，冷却至室温，修复完毕。【如遇表达较弱的指标，则可用EDTA（PH9.0）作为修复液进行抗原修复。如遇骨组织、脑组织等易掉片组织，则采用微波修复，修复温度控制在 80℃左右，修复液可用2×柠檬酸（PH6.0）。】

3. 内源性酶阻断：用纯水配制3%H2O2溶液，将切片放于溶液中，室温孵育20min。如遇易掉片组织，可适当降低H2O2浓度和孵育时间。

4. 封闭：在组织上滴加封闭液，37℃孵育30min。

5. 一抗孵育：使用抗体稀释液按照适宜浓度稀释一抗，在组织上滴加抗体，4℃过夜孵育，或者37℃孵育1h。

6. 二抗孵育：在组织上滴加HRP酶标记的二抗，37℃孵育1h。

7. 孵育TSA试剂：在组织上滴加TSA-XXX荧光染料，37℃孵育30min，再用PBST洗涤3次，每次5min。

8. 抗体洗脱：在组织上滴加抗体洗脱液，室温孵育15min（37℃孵育更佳）。

9. 重复4-8步骤（孵育其他TSA-XXX荧光染料）。

10. DAPI染核：将DAPI工作液滴加到组织上，室温孵育5min，再用PBS洗涤3次，每次5min。将液体甩干，在组织上滴加抗荧光淬灭封片剂，盖上盖玻片，镜检拍照。

实验注意事项

1. 一抗优先选择单克隆抗体，其次选择多克隆抗体。 如果是小鼠样本，尽量避开选择小鼠来源一抗，若选择小鼠一抗，二抗除了与一抗结合，还会结合组织内源性的IgG，产生非特异性着色。

2. 若组织容易掉片，修复时可采用60℃水浴方式进行修复。

3. 与荧光二抗相比，TSA试剂盒有更高的灵敏度和更强的信号。因此一抗使用浓度需降低，

一般在抗体说明书建议的稀释比基础上适当扩大稀释倍数，以减少非特异性结合导致的背景荧光。建议设置一抗梯度浓度获得最佳效果。

4. 如背景荧光较强，建议增加组织自发荧光淬灭步骤。

5. 为保证抗体洗脱效果及荧光多重标记效果，建议正式多重标记之前分别做各个抗体的TSA 单标测试，确定每个抗体单标都能做出较理想的阳性后再根据单标测试结果去确定多标的抗原修复条件、抗体顺序等实验条件。

6. 如果有些抗体效价高，亲和力较强，不易洗脱彻底，可增加洗脱次数。

7. 抗体洗脱液流动性强，片子未水平放置时，试剂易流出圈外，影响洗脱效果，需在操作过程注意切片平放。

表3 相关产品

另外，我们提供全套的TSA标记服务，可针对靶标丰度从中选择最佳的检测技术，使用最合适的检测波长匹配您的多色标记实验。具体查看TSA技术服务-EnkiLife

六标七色结果展示：

大鼠肾（六标7色）——10x

大鼠脑（六标7色）——5x