技术指南|细胞培养之细胞冻存篇
1.细胞冻存步骤
(1)收集消化好的细胞到离心管中（悬浮细胞可直接离心）1000rpm离心3-5min，弃去上清；
(2)加入细胞冻存液重悬细胞并计数。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml，将悬液加入到冻存管中；
(3)将冻存管放入梯度冻存盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中长期保存。
2.细胞冻存的培养基成份主要是什么？
细胞冻存时最常使用的冻存液是含5-10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90-95 %原来细胞生长所用的新鲜培养基均匀混合而成。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，所以不能将DMSO直接加入细胞悬液中，必须在使用前先行配制并低温处理。
3.细胞冻存的DMSO等级和无菌过滤方式
细胞冻存使用的DMSO等级，必须为Tissue culture grade级别的DMSO (例如Sigma D2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4 C，避免反复冻融造成DMSO的裂解而释出有害物质，并可减少污染风险。如果要过滤DMSO，则须使用耐DMSO的Nylon材质滤膜。