【ELISA样本处理指南】血清 / 血浆

在ELISA实验中，样本质量直接影响结果的准确性。即使是最好的试剂和设备，也无法弥补因样本处理不当带来的问题。

蛋白质降解、污染、保存条件不当等常见问题，往往源于样本处理环节的疏忽。这些看似微小的细节，可能导致实验失败或数据偏差。

本指南将帮助您：

ü  掌握不同样本类型的正确处理流程

ü  避免常见的样本处理错误

ü  建立标准化的操作规范

正确的样本处理是获得可靠ELISA结果的第一步。让我们从基础开始，确保每一份样本都能发挥其应有的价值。

血清与血浆成分差异：

血清(Serum)与血浆(Plasma)是针对血液采取了不同的处理方法得到的样本，因凝血过程影响，两者在成分上有一定差异，且这种差异在样本制备、保存等过程中均有体现，在样本采集之前应有所了解，以便选择最合适的样本制备策略。

《血清血浆差异对照表》

血清制备

以下为血清的制备过程：

采集 - 凝血 - 离心 - 分装 - 保存

准备工作

采血

使用一次性采血针配合血清分离管（Serum Separator Tube，SST）进行采血，全程应注意避免血样染菌。采集完血样后轻轻倒置1-2次，让凝血剂与血样充分融合。做好标记，静置。

凝血

离心

提示：离心后血清层应清晰、呈淡黄色，血细胞层与凝胶层（若使用 SST）之间无混浊。若出现血细胞漂浮或血清呈粉红色，说明已发生溶血，需重新采血。溶血会释放大量内源性HRP酶，产生较为严重的假阳性。

分装

1.  操作环境

在洁净的生物安全台或无尘工作台进行，佩戴一次性手套，使用无菌耗材，避免染菌带来额外的酶导致蛋白降解。

2.    分装方式

使用低吸附的离心管（如 0.5 mL、1.5 mL、2 mL）进行一次性分装，避免反复抽吸。

每管体积≤ 80 %管容量，留出足够空间防止冷冻时膨胀破裂。

3.      添加抑制剂（视实验需求）‍

建议在离心完后添加，但应提前了解清楚抑制剂是否对后续实验有影响。具体抑制剂参照《血清、血浆酶来源参照表》。

保存

血浆制备

以下为血浆的制备过程：

采集 - 离心 - 分装 - 保存

准备工作

采血

采血：

使用一次性采血针配合抗凝管进行采血，确保管内抗凝剂与血液比例约为 1:9，全程应注意避免血样染菌。

混匀：

血液采集完成后，需轻柔地将管子正转反（通常 5-10 次），确保抗凝剂与血液充分接触。不要用力摇晃，也不要用力敲击管子，以免导致血细胞破裂。

采血后需在30分钟内离心，避免过长时间静置导致代谢物变化。

离心（常规检测只用离心一次）

若需测定血小板因子或凝血因子，需要严格控制血浆的处理时间，通常需在采血后 30 分钟内完成离心，并且需进行二次高转速离心。

二次离心（血小板贫血血浆，需二次离心）

提示：分取的血浆必须清澈透明。如果出现红色浑浊（红细胞破裂），说明样本溶血，需重新采血。溶血会导致血浆中出现血红蛋白、铁离子和细胞内酶，严重干扰实验结果。

分装

1.  操作环境

在洁净的生物安全台或无尘工作台进行，佩戴一次性手套，使用无菌耗材，避免染菌带来额外的酶导致蛋白降解。

2.    分装方式

第一次离心结束后，血管会分层，顶部的透明层即为血浆，底部是血细胞，之间可能有薄薄的白细胞层。使用无RNA酶/蛋白酶的低吸附离心管（如 0.5 mL、1.5 mL、2 mL）进行一次性分装，避免接触中间层（白细胞层），‍避免反复抽吸。通常分装为 200 - 500 μL 的小体积管，以避免反复冻融。

标记：管身贴标签，记录采样时间、受试者编号、离心条件、抗凝剂类型等信息。

3.     添加抑制剂（视实验需求）‍

建议在离心完后添加，但应提前了解清楚抑制剂是否对后续实验有影响。具体抑制剂参照《血清、血浆酶来源参照表》。

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