人B淋巴细胞母细胞系LCL 721.221
一. 细胞起源
起源：LCL 721.221是通过γ射线诱变和免疫筛选从EB病毒（EBV）转化的淋巴母细胞系LCL 721衍生而来，特异性缺失HLA-A、-B、-C类I主要组织相容性复合体（MHC-I）表达[1]。其HLA-A/B/C-null表型使其成为研究非经典HLA-I类基因功能的理想模型[1][2]。
二. 生物学特性
形态特征：属悬浮细胞，细胞呈圆形，聚团生长。
表面标志物缺失：不表达经典HLA-A、B、C抗原，但保留β₂-微球蛋白（β2m）[1]。
肽段加载复合物（PLC）表达：
表达PLC所有必需组分，包括ERAP1、TAP、tapasin、ERp57和钙网蛋白（CRT）[2]。
可溶性HLA-B*44分子能与PLC结合，证明其参与抗原呈递通路[9]。
HLA依赖性：
表面表达HLA-B44变异体（如156Arg）依赖tapasin存在；在tapasin缺失的LCL 721.220细胞中，仅B44:28能独立表达[2]。
位置156的氨基酸多态性（如Arg/Asp）影响肽段结合稳定性和tapasin依赖性[2]。
三. 培养与储存
培养基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S[3]。
缺氧培养适应性：可在1%氧气条件下培养，模拟肿瘤微环境[4]。
储存：30% 基础培养基+60%FBS+10%DMSO，液氮保存[3]。
四. 研究应用领域
HLA-I类分子机制研究：
用于解析肽段选择、HLA折叠稳定性及tapasin在抗原呈递中的作用[2]。
通过基因转染（如慢病毒载体）表达特定HLA变异体，研究其肽段结合特征[2]。
肿瘤免疫微环境模拟：作为模型研究HLA-G等免疫抑制分子对淋巴细胞功能的调控[4]。
免疫治疗开发：用于评估T细胞/NK细胞对HLA缺陷细胞的杀伤效应[4]。
五. 研究进展
肽段组学分析：质谱鉴定B44亚型（如B44:28）在tapasin存在/缺失条件下的差异肽段，揭示156位点对肽段亲和力的影响[2]。
计算结构生物学：
分子建模显示156Arg通过氢键网络（连接114Asp、97Arg）稳定肽段-HLA复合物，增强非优化肽段的呈递[2]。
证实156位点残基与肽段骨架的直接接触影响复合物稳定性[2]。
基因编辑应用：利用shRNA沉默tapasin，验证其对HLA-B*44表面表达的必要性[2]。
六. 局限性与克服方法
局限性：
与LCL 721.220存在遗传背景差异，可能影响蛋白质组学比较[2]。
部分HLA变异体（如156Gly）无法在其表面表达，限制突变体功能研究[2]。
克服方法：
联合CRISPR/Cas9技术构建等基因背景细胞系[9]。
采用原代B细胞或新型工程化细胞系替代[4]。
七. 总结与展望
LCL 721.221是研究HLA-I类分子生物学和抗原呈递机制核心工具。未来研究方向包括：
精准免疫治疗：利用其HLA-null特性开发通用型CAR-T/NK细胞疗法。
多组学整合：结合单细胞测序与蛋白质互作组学，深化PLC动态组装机制研究。
微工程化模型：构建3D类器官模拟淋巴组织微环境，提升转化医学价值。
参考文献
1. Shimizu Y, Geraghty D, Koller B, et al. Transfer and expression of three cloned human non-HLA-A,B,C class I major histocompatibility complex genes in mutant lymphoblastoid cells. PNAS. 1988;85(1):227-231. PMID: 3257570.
2. Badrinath S, Saunders P, Huyton T, et al. Position 156 influences the peptide repertoire and tapasin dependency of human leukocyte antigen B*44 allotypes. Haematologica. 2012;97(1):98-103. PMID: 21993682.
3. 人B淋巴细胞母细胞系LCL 721.221说明书. 武汉恩玑生命科技有限公司.
4. Wu D, Kuiaste I, Moreau P, et al. Rescuing lymphocytes from HLA-G immunosuppressive effects mediated by the tumor microenvironment. Oncoimmunology. 2015;4(6):e1008351. PMID: 26155407.