Q1:怀疑细胞有污染该如何判定？
A1:第1步，肉眼观察；
培养基的颜色是否变黄？液体是否变浑浊？
第2步，显微镜观察（200X、 400X）；
培养基里是否有快速游动的颗粒物在做非布朗运动？细胞空隙间和培养液中是否有细沙一样的东西覆盖？培养皿内是否长有“小蘑菇”？细胞状态是否发生变化？
Q2:细胞污染的种类有哪些？
A2:（1）细菌污染：出现细菌污染的细胞，培养基会显著变黄、变浑浊，显微镜下可见球状、杆状等细菌在培养基中不规则快速游动，细菌形态规则、分布均匀。细菌污染后，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡；
（2）真菌/霉菌污染：出现真菌污染的细胞，培养基颜色通常无变化，在污染早期很难发现，显微镜下可见真菌菌丝。在真菌/霉菌污染2-3天后，培养基中会形成肉眼可见的白色或黄色真菌菌落，显微镜下可观察到菌落结构。真菌污染后，细胞生长变慢，最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡；
（3）支原体污染：无法通过肉眼或显微镜直接进行观察，出现支原体感染的细胞，细胞状态会明显变差，生长缓慢，细胞碎片增多，可使用PCR检测法、一步显色法、荧光染色法进行验证；
Q3:已经发现有细胞污染，该如何解决呢？
A3:（1）细菌污染，若发现较早，细胞状态未受影响，可以尝试用10%的双抗清洗去除，或使用庆大霉素50U/mL、四环素10μg/mL等其它抗生素；若细胞状态已经很差，建议直接丢弃，重新复苏；
（2）真菌污染，难以去除，建议直接丢弃；
（3）支原体污染，加入50ug/mL支原体清除试剂，处理至少2周；
Q4:如何避免细胞污染?
A4:一、环境要求
（1）细胞房需保持空气洁净；
（2）超净台及生物安全柜摆放合理，避免相互影响；
（3）细胞间定期进行紫外照射和臭氧熏蒸，培养箱需定期清洗，细胞房地面使用84消毒液拖地；
（4）超净台使用前需紫外照射30min，使用后需用75%酒精进行擦拭；
（5）进入细胞间必须穿上细胞间专用的无菌实验服，戴上手套口罩，换上细胞间专用工鞋；
二、实验操作要求
（1）从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手，尽量缩短开门时间和减少开门次数；
（2）操作期间，试剂不用时，及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过；
（3）使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生；
（4）向废液缸打废液时，需轻柔，以免造成水花四溅，污染枪头、枪体。实验结束，及时倒掉废液缸垃圾，冲洗之后喷洒酒精，放入超净台紫外照射杀菌；
Q5：细菌污染应该怎么处理?
A5：处理方法
(1) 细菌污染的细胞，培养基会明显浑浊，静置后会在底部形成一层沙状物，显微镜下观察细胞被细菌包围。
(2) 细菌污染检测，可以取细胞培养上清1ml左右，接种到3ml LB培养基，摇菌过夜。若培养基明显变浑浊，则证明细菌污染;若无明显变色，证明无污染。
(3) 细菌污染的细胞处理后及时丢弃，不会对其他细胞造成影响。
(4) 细胞碎片应注意与细菌、真菌污染区分，主要区别在于细胞碎片不会明显增殖，而细菌、真菌在过夜后即可明显观察到增殖，甚至完全遮蔽细胞。
(5) 细菌污染一般在污染源进入后1-2天即可爆发，故发现污染时可以自行溯源。
Q6：真菌污染应该怎么处理
A6：处理方法
(1) 真菌污染的细胞，显微镜下可以明显看到树枝状霉菌菌丝或其他形态的菌体，肉眼可以看到明显白色斑点或者培养基内颗粒状物质漂浮。
(2) 真菌无须检测，显微镜及肉眼即可分辨。
(3) 真菌污染的细胞，处理后及时丢弃，同时需要对培养箱及操作台进行消毒处理，避免污染其他细胞。
(4) 真菌污染一般在污染源进入2-4天内即可爆发，发现污染时可以自行溯源。
Q7：支原体污染应该怎么处理
A7：处理方法
(1) 支原体污染在国内是普遍存在的问题，大部分实验室缺乏检测及控制支原体污染的方法，导致有很大比例的细胞含有支原体污染。
(2) 支原体检测方式多种多样，PCR、荧光法、培养法、试剂盒等，不同实验方式检测的灵敏度、特异性、针对的支原体类型都不太一样，所以各种检测方法检出结果有时会有出入。即同一个样本，有的方法检出阳性，有的阴性，有的强有的弱。
(3) 支原体处理的，用6孔板培养，每天换液，细胞长满就传代丢弃部分，基本可以保证2-3周清除干净。