Q1:成软骨诱导培养基诱导后的软骨是透明软骨还是纤维软骨?

理论上是纤维软骨。

Q2:成软骨诱导染色后是否需要进行封片?

成软骨诱导后进行结果检测,用阿利新蓝对切片染色后,拍照记录染色结果,此时细胞已经死了,后续一般不会用作其他用途,不需要封片的。

Q3:培养基出现沉淀还能用吗?

有少量絮状沉淀多为胆固醇、蛋白析出,400-600g离心5min取上清可继续用;大量浑浊并变色沉淀则是污染或失效,立即丢弃。

Q4:诱导后不形成软骨微球、细胞不聚集如何解决?

选择低粘附性材料的培养器皿,避免细胞代数过高分化潜能降低,避免细胞数量不足,软骨诱导不能贴壁平铺,必须离心成团培养,每球建议1.5×10⁵~2.5×10⁵ 个细胞。

Q5:阿利新蓝染色很浅是为什么?

诱导时间不足、固定不当、染液失效都会造成阿利新蓝染色很浅,至少诱导21天,规范固定,使用pH2.5未失效的阿利新蓝染液进行染色。

Q6:诱导初期大量死亡是因为什么?

培养基未预热、地塞米松浓度偏高、换液冲击过大都会造成细胞死亡。在操作前我们先要37℃预热培养基,轻柔换液,沿孔壁加液。

Q7:软骨微球为什么会松散、散架、贴壁散开?

成团离心不足、细胞状态差、操作过于粗暴都会导致软骨微球为松散、散架、贴壁散开。提高成团离心力,使用状态良好细胞,避免吹打微球可以很好的避免这个问题。

Q8:微球中心发黑、坏死是为什么?

微球中心发黑、坏死是因为微球过大缺氧、换液不及时、营养不足,要控制微球大小,每 2~3 天换液。



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