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以下注意事项有助于选择二抗：

1. 确定一抗的宿主物种，即二抗反应物种（例如，兔抗PERK (16C18)单抗，即一抗宿主为兔）。
2. 为二抗选择合适的宿主物种（例如驴抗小鼠IgG，二抗宿主为驴）。
3. 二抗的交叉反应性或特异性，是否经过交叉吸附。
4. 考虑是否要进行多重标记应用或使用的样品是否含有内源性抗体。
5. 特异性：能否正确结合一抗的类别或片段。
6. 根据检测方法选择合适的偶联物。

二抗是针对一抗的物种而产生的。因此，您需要一种在一抗宿主物种之外的其他物种中产生的二抗。例如，如果您的一抗是在兔子中产生的，您将需要一种在非兔子宿主物种（例如山羊、小鼠等）中产生的抗兔二抗。

我们推荐的抗体浓度稀释度数值有一部分是在抗体开发过程中由实验得出的，或者基于我们的合作者以及其他客户的经验，由于样本或实验条件的差异，可能会和用户的实验效果存在差别，如果我们的推荐对您不适用，请尝试使用几种不同的稀释度/浓度进行实验。

山羊抗小鼠IgG (H+L)有几种级别，且IgG抗体和IgM抗体存在部分序列相似，因此未经过交叉吸附的山羊抗小鼠IgG (H+L)可能会和小鼠IgM抗体存在一定程度交叉反应，如需要对IgM抗体完全无交叉反应，可选择山羊抗小鼠IgG1、山羊抗小鼠IgG2a、山羊抗小鼠IgG2b等抗体。

山羊抗小鼠IgG (H+L) 会结合所有类别的小鼠IgG，包括IgG3。

该抗体未针对大鼠IgG进行交叉吸附，我们对此没有太多信息。但考虑到所询抗体是多克隆抗体，不能排除这种可能性。

山羊抗小鼠IgG (H+L)其免疫原同时包含重链和轻链。轻链可以是κ或λ链，因此该抗体会与带有κ链的一抗发生反应，但并非特异性针对κ链。

抗体标有两种不同的偶联物，这使得在同一样品上进行显色及荧光成像成为可能。因此可以进行多模式研究，对此我们可以提供定制标记。

二抗是结合于一抗的抗体，因此二抗的应用范围更多是和一抗相关，如若一抗能应用在某些免疫检测，二抗同样也是可以，因此最终应用范围主要取决于一抗的应用范围、二抗标记物的种类和信号输出体系。

当荧光染料暴露在吸收波长强光下时，都会在一定程度上出现褪色或"光漂白"现象。可能的解决方案：

1. 选择更耐光染料，比如Fluor染料；
2. 灵活设置复染剂和像场，然后切换到目标染色加以成像。
3. 减少曝光时间及强度，例如降低激光功率或使用中性密度滤光片。
4. 观察标记样品的时间尽可能的短，并在不观看时关闭遮板。
5. 使用具有较低数值孔径的物镜，如低功耗物镜。

经典的ELISA实验体系通常使用双抗夹心法，有包被抗体和检测抗体两种一抗，如果两种抗体都是鼠单抗，那么HRP标记的羊抗小鼠IgG会和两种抗体都结合，失去了检测意义，因此ELISA体系中需要包被抗体宿主不能是小鼠，而检测抗体必需是小鼠，另外检测的样本类型也不应该是小鼠IgG或类似物。

使用基于不同的荧光染料标记的二抗进行多色免疫荧光实验是可以实现的，但需要注意进行精心设计考虑：

1. 荧光染料（荧光基团）的选择：选择的荧光染料其激发和发射光谱应尽可能分开。光谱重叠越少，串色的可能性就越低。优先选择发射峰间隔较大的染料组合（例如Fluor 488, Fluor 555, Fluor 647 的组合就非常经典）。
2. 仪器匹配：确保您选择的荧光染料能被您实验室的显微镜或成像系统的激光器和滤光片组有效激发和检测。在选择染料之前，先查阅仪器的配置手册。
3. 亮度与表达量匹配：将最亮的荧光染料（如Fluor 647, Cy5）分配给表达量低的目标蛋白。将较暗的荧光染料（如FITC,Cy2）分配给表达量高的目标蛋白。这样可以平衡各个通道的信号强度，避免强信号掩盖弱信号。
4. 二抗的特异性与交叉吸附：这是避免非特异性交叉反应的关键，直接关系到结果的可靠性。必须选择经过交叉吸附处理的二抗。这种处理意味着该二抗已经过纯化，去除了可能与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应的抗体。例如，如果您同时使用小鼠和大鼠的一抗，那么您的抗小鼠二抗应该经过大鼠血清蛋白的交叉吸附，反之亦然。这能确保二抗只与它特定靶向的一抗结合，而不会与其他物种的一抗发生交叉反应。
5. 宿主物种：所有二抗都应来源于同一宿主物种（例如，全部是驴源或全部是山羊源）。这可以避免二抗之间相互识别结合（例如，抗兔的二抗不小心结合了抗小鼠的二抗）造成的假阳性。
6. 实验设计与对照：没有适当的对照，多色实验的结果将难以解释。单色对照是必须设置的对照。每次实验都应包括只加一种一抗/二抗对的样品，而其他通道只加二抗稀释液（或不加一抗）。通过这个对照，您可以在正式实验的图像采集设置下检查每个通道是否存在串色。空白对照：完全不加入一抗，只加二抗混合物，用于检测二抗的非特异性结合。顺序孵育：建议先分别孵育不同物种来源的一抗，然后再混合孵育对应物种的二抗。这比混合孵育一抗再混合孵育二抗更能减少交叉反应的风险。
7. 抗体浓度优化（滴定）：使用前务必对每一对抗体进行滴定，找到信噪比最高的最佳浓度。过高的抗体浓度会增加背景和非特异性结合。
8. 图像采集与处理：即使实验做得很好，图像采集不当也会前功尽弃。不要同时激发和采集所有通道。应设置程序，依次对每个通道进行单独激发和采集。这样可以完全消除通道间的串色问题。光谱扫描与线性：如果您的仪器具备这个功能（如共聚焦显微镜），它可以有效分离光谱高度重叠的荧光信号，是进行多色实验的强大工具。后期处理：如果发现有轻微串色，可以使用软件进行光谱分离计算，但最好的方法还是在实验设计阶段就避免串色。