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Fluor350是一种优异的蓝色荧光染料，是在香豆素染料7-AMCA骨架上进行改造后的染料,可作为AMCA的优异替代染料，常用于荧光成像和流式细胞分析中，具有良好的水溶性和pH值不敏感性。Fluor350的激发和发射光图谱与DAPI比较接近，可以直接用DAPI的滤片组来成像。

图1: Fluor350SE化学结构示意图，显示其分子组成和键合方式

图2: Fluor350激发和发射光谱图，显示其在346nm激发和445nm发射的特性

图3:Fluor350及近似染料光谱（AMCA，DAPI）对比

图4: Fluor350与AMCA相对荧光强度比较，显示标记蛋白后Fluor350的优异性能

Fluor405蓝色荧光染料的激发/发射最大值为400/424nm，与目前在荧光显微镜和流式细胞术中广泛使用的405nm紫光激光器的光谱线近乎完美匹配，且激发和发射光谱和BV421染料的重合度很高。Fluor405是Cascade Blue染料的衍生物，但是经过结构改造后荧光特性更优。Fluor405染料与绿色荧光团的光谱重叠极小，使其成为多色应用的理想选择。

图1: Fluor405SE化学结构示意图，显示其分子组成和键合方式

图2: Fluor405激发和发射光谱图

图3: Fluor405及近似染料光谱（DyLight 405,BV421）对比

在400-450nm波长范围内吸收光的活性染料中，500nm波长以上通常不会产生明显的荧光。而Fluor430染料填补了这一波长范围的空白。该染料在430nm的吸收峰值附近进行激发时，会伴随着极大的斯托克斯位移和强烈的黄绿色荧光。

图1: Fluor430SE化学结构示意图，显示其分子组成和键合方式

图2: Fluor430激发和发射光谱图

Fluor488是磺化后的罗丹明绿。通过引入两个磺酸根离子，Fluor488的水溶性大大增强，pH稳定性，光稳定性也提高。和荧光素类染料不同，Fluor488的荧光在较宽的pH范围内(4-10)保持不变。由于带多个负电荷，Fluor488不易分子间聚集，多个染料分子标记同一蛋白时，不易荧光自淬灭(self quenching)，或引起蛋白聚集。Fluor488是荧光素（FITC或FAM）及CY2的优异替代品，用于生物偶联物单分子检测、荧光相关光谱和荧光偏振测量表现极为突出。在荧光显微镜和流式细胞术也得到广泛应用，Fluor488是目前极佳的水溶性小分子绿色荧光染料之一。

图1: Fluor488SE化学结构示意图，显示其分子组成和键合方式

图2: Fluor488激发和发射光谱图

图3: Fluor488近似染料光谱（Cy2, FITC）对比

图4: 对用Fluor 488染料和异硫氰酸荧光素（FITC）制备的山羊抗小鼠IgG结合物的相对荧光强度进行比较。使用相同抗体量, 结果显示Fluor 488标记的抗体具有更高的荧光亮度。

图5: Fluor488 标记兔抗小鼠 IgG 抗体与 Cy2 标记的兔抗小鼠 IgG 抗体的亮度对比。人血细胞样本先用正常兔血清进行封闭处理，然后与抗 CD3 小鼠单克隆抗体一起孵育，细胞经过洗涤、重悬后，分别与相同浓度的Fluor 488 或 Cy2 标记的兔抗小鼠IgG 二抗一起孵育，红细胞裂解后，流式检测，显示Fluor488 标记的二抗效果更优。

图6: 使用Fluor488和FITC直接标记anti Mouse CD4单抗，使用相同抗体量，流式检测信号强度，Fluor488标记的anti Mouse CD4具有更强的荧光信号强度。

Fluor555是一种橘黄色-橙红色荧光染料，是Cyanine3的类似物，常用于代替Cyanine3、TAMRA染料使用。Fluor555染料的极性很大，水溶性强，荧光亮度和荧光稳定性也极好，是蛋白/抗体标记的良好染料。从化学结构上看，Fluor555的母核是花菁素Cyanine3，但是母核上带有多达4个磺酸根基团，四磺酸结构让其具有极度亲水性，染料标记到蛋白表面后，不会改变蛋白表面极性，降低了蛋白疏水化聚集沉淀的风险，同时极大降低了染料局部靠近而荧光淬灭的概率，因此Fluor555标记后的蛋白往往发出更强的荧光。但因为目前市面上使用的流式细胞仪大部分是传统流式细胞仪（非光谱流式细胞仪），激光器的适配度不是最佳，Fluor555染料更多是用在荧光成像领域。

图2: Fluor555激发和发射光谱图

图3: Fluor555及近似染料（Cy3，TRITC）对比

图4: 通过将等摩尔浓度的游离荧光素555（Fluor 555）和Cy3持续进行光照，每隔五秒采集一次数据点。荧光强度已被归一化至相同的初始强度。结果显示Fluor 555具有更优异的耐光漂白性能。

图5:不同染料与蛋白质结合比例下，Fluor555 和 Cy3 两种染料偶联山羊抗兔 IgG 抗体的相对荧光强度比较。显示Fluor555 具更高的相对荧光强度，结合摩尔比（DOL）高达8以上信号不衰减。

Fluor568荧光染料与561nm激光器完美匹配，该红橙色荧光染料激发/发射最大值约为578/602nm，在许多共聚焦激光扫描显微镜中使用的561nm二极管激光器中能获得最佳激发效果。Fluor568具有罗丹明类化合物的母核，通过引入两个磺酸根离子来优化染料的水溶性和光学性质，在被激发时发明亮的橘红色荧光，荧光非常灵敏、稳定，可用于检测低丰度靶标，是优异的水溶性小分子荧光标记染料。

图2: Fluor568激发和发射光谱图

图3: Fluor568及近似染料光谱(Rhodamine Red)对比

Fluor594是在Fluor568结构基础上甲基化修饰的罗丹明类化合物。两个磺酸根离子也起到优化染料性质的作用。在被激发时发明亮的红色荧光，荧光非常灵敏，稳定，可用于检测低丰度靶标。Fluor594是优异的水溶性小分子荧光标记染料，适用于标记各种目标分子，广泛应用于各种生物实验。用Fluor594染料制备的结合物在光谱红色区域发出荧光，因此特别适用于与绿色荧光探针结合用于多重标记实验。Fluor594的光谱特征和Cyanine3.5、Texas Red光谱特征相似，但是荧光强度更强，是Texas Red的优异替代物。

图1: Fluor594SE化学结构示意图，显示其分子组成和键合方式

图2: Fluor594激发和发射光谱图

图3: Fluor594及近似染料光谱（DyLight 594，Texas Red）对比

图4: 不同染料与蛋白质比例下，Fluor 594 和 Texas Red-X 标记的兔抗小鼠 IgG 抗体相对荧光强度比较。显示Fluor 594的荧光强度更强。

Fluor647荧光染料的光谱几乎与Cyanine5光谱完全一致，因此为Cyanine5设计的光学滤光片的匹配度也可达到最佳。然而，Fluor647抗体偶联物总荧光强度通常会明显高于Cyanine5偶联物。并且Fluor647与大多数蛋白质、寡核苷酸和核酸偶联时，其吸光度或荧光光谱几乎没有变化，因此在相同的取代程度下，总荧光强度更高，是Cyanine5的优良替代物。

图2: Fluor647激发和发射光谱图

图3: Fluor647及近似染料光谱（APC, Cy5）对比

图4: 对Fluor647和Cy5荧光染料抗体偶联物亮度的比较。显示Fluor 647偶联物的亮度远高于使用Cy5偶联物的亮度。

Fluor680染料的峰值激发波长为680nm，最大发射波长为702nm，其光谱特征与Cyanine5.5染料相似。Fluor680染料的荧光与常用的其他红色荧光染料（如四甲基罗丹明、R-藻红蛋白、Fluor594和Fluor647）的发射光信号明显分离，因此非常适合进行多色标记。

图2: Fluor680激发和发射光谱图

图3: Fluor680和Cy5.5的荧光光谱对比。显示两者光谱基本一致。

Fluor750与Cyanine7染料在光谱上极为相似，是Cyanine7的优异替代物，荧光发射最大波长为770nm，与常用的远红荧光物质（Fluor647或APC）最大发射光波长相比，相隔较远，因此便于进行多色分析。

图2: Fluor750激发和发射光谱图

图3: Fluor750及近似染料光谱（Cy7）对比