产品概述
EnkiLife Fluor555标记试剂盒包含标记抗体蛋白的多个组分，如高性能的Fluor555荧光染料、纯化用超滤离心管、洗脱标记缓冲液、标记蛋白保存液等，可轻松可靠地标记抗体、蛋白质和其他分子，以便用作荧光探针。
产品特点
- 快速：标记反应时间需约30分钟，同时兼顾标记效果和标记效率
- 简便：每只染料试剂已优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，按照步骤操作即可获得良好效果
- 灵活：对大规格试剂盒中的染料进行分装，批次性能一致，方便多次使用
- 标记效果突出：优化的标记缓冲液使标记位点相对固定，增强标记后抗体的同质性
- 胺特异性标记：Fluor555上的活性基团能高效地结合抗体或其他纯化蛋白质上的伯胺基团，从而实现染料和抗体的共价标记结合
- 标记蛋白：主要针对IgG类抗体，和IgG抗体类似大小及性质的蛋白也可标记
染料简介
Fluor555是一种橘黄色-橙红色荧光染料，是Cyanine3的类似物，常用于代替Cyanine3、TAMRA染料使用。Fluor555染料的极性很大，水溶性强，荧光亮度和荧光稳定性也极好，是蛋白/抗体标记的良好染料。从化学结构上看，Fluor555的母核是花菁素Cyanine3，但是母核上带有多达4个磺酸根基团，四磺酸结构让其具有极度亲水性，染料标记到蛋白表面后，不会改变蛋白表面极性，降低了蛋白疏水化聚集沉淀的风险，同时极大降低了染料局部靠近而荧光淬灭的概率，因此Fluor555标记后的蛋白往往发出更强的荧光。
Fluor555染料性质
基本特性
类似染料：Alexa Fluor® 555,ATTO 550,Cy®3,Cyanine3, DyLight® 549, TRITC
常用激发光源：532 to 568 nm
最大激发波长：555 nm
最大发射波长：572 nm
摩尔消光系数：150000 L/(mol·cm)
量子产率：0.1
外观：红色固体
试剂盒规格
| 产品组分 | 不同规格组分含量 | 储存温度 | ||
|---|---|---|---|---|
| 40μg抗体 | 200μg抗体 | 2mg抗体 | ||
| 活化的Fluor555 | 1管 | 5管 | 5管 | 开封后-20℃避光保存 |
| 50KDa超滤管* | 1 set** | 1 set** | 1 set** | RT |
| 标记缓冲液S | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 2~8℃ |
| 1×PBS (pH 7.4) | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 2~8℃ |
| DMF | 100 μL | 100 μL | 100 μL | 2~8℃, 避光 |
| 标记蛋白保存液 | 200 μL | 1 mL | 5 mL | 2~8℃ |
| 标记抗体量 | 每管染料可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 | 每管染料可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 | 每管染料可标记100~400μg抗体 推荐标记200μg抗体 | |
* 超滤管分子量截留值50KDa
** 1 set = 1个超滤管和收集管
标记原理
在一定的化学反应条件下，荧光染料活化基团专一性与抗体蛋白上的伯胺基反应，形成稳定的酰胺键，从而实现与抗体蛋白的标记偶联。
常规标记流程
- 1、超滤换液浓缩
- 2、标记反应
- 3、纯化
- 4、DOL计算，收集保存
Fluor555染料应用
免疫荧光
标记二抗作为免疫荧光探针，实现比Cy3更好的检测效果
凋亡检测
标记Annexin V进行细胞凋亡检测
诊断检测
标记甲流NP蛋白抗体，与量子点标记乙流抗体构建侧向流层析试纸条
细胞研究
标记钙调蛋白（Calmodulin），监测神经元活动引发的钙闪烁波
有丝分裂研究
标记β-微管蛋白（β-Tubulin），实时追踪有丝分裂期纺锤体组装过程
生物标记检测
标记Tyramide用于低丰度靶标（如PD-L1）检测，提高肺癌活检灵敏度
Fluor555标记试剂盒应用效果
4%多聚甲醛固定的大鼠肝癌组织免疫荧光检测(IF)
一抗：SMA小鼠单抗，1：400稀释
A:国内知名厂商 555-山羊抗小鼠IgG(H+L)0.5mg/ml，1:200稀释
B:EnkiLife Fluor555标记试剂盒（SKU:RE80012p) ,标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)0.5mg/ml，1:200稀释
4%多聚甲醛固定的小鼠脑组织免疫荧光检测(IF) (直接法）
一抗：EnkiLife Fluor555标记试剂盒（SKU:RE80012p) ,标记的UCH-L1/PGP9.5兔多抗 0.5mg/ml，1:200稀释其他问题
参见常见问题答疑
