FAQ|细胞培养常见问题
1. 培养液pH值变化太快：
原因：CO2张力不对、培养瓶盖拧得太紧、NaHCO3缓冲系统缓冲力不足、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染。
解决方案：调整CO2浓度、松开瓶盖、加HEPES缓冲液、更换培养液、丢弃培养物或用抗生素除菌。
2.培养液出现沉淀，pH值不变：
原因：洗涤剂清洗后残留磷酸盐、冰冻保存培养液。
解决方案：用去离子水冲洗玻璃器皿、加热培养液以溶解沉淀、如沉淀存在则丢弃培养液。
3.培养液出现沉淀，同时pH发生变化：
原因：胰蛋白酶消化过度、支原体污染、培养液中无贴壁因子。
解决方案：缩短胰蛋白酶消化时间、分离培养物检测支原体、改变培养液成分。
4.悬浮细胞成簇：
原因：培养液中含钙、镁离子、支原体污染、蛋白酶过度消化。
解决方案：用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞、分离培养物检测支原体、用DNase I处理细胞。
5.原代细胞培养物污染：
原因：原代培养组织在进入培养前已污染。
解决方案：用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。
6.培养细胞死亡：
原因：培养箱内无CO2、温度波动太大、细胞冻存或复苏过程中损伤、培养液渗透压不正确、有毒代谢产物堆积。
解决方案：检测培养箱内CO2、检查培养箱内温度、取新的保存细胞种、检测培养液渗透压、换入新鲜培养液。
7.培养细胞生长减慢：
原因：更换不同培养液或血清、培养液中必需成分耗尽或缺乏、培养物中有少量细菌或真菌污染、试剂保存不当、接种细胞起始浓度太低、细胞已老化、支原体污染。
解决方案：比较新旧培养液和血清、换入新鲜配制培养液、补加必需成分、用无抗生素培养液培养、正确保存血清和培养液、增加接种细胞起始浓度、分离培养物检测支原体。
8. 血清解冻后有絮状沉淀物：
解决方案：将血清分装至无菌离心管内，稍微离心，取上清液加入培养基内一起过滤。
9. 储存冰箱中的胎牛血清出现沉淀：
解决方案：推荐在-20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
10. 如何避免沉淀物的产生：
解决方案：解冻血清时规则摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
11.预防细胞培养污染的措施包括：
穿戴合适的实验服和手套，并进行消毒处理；
使用无菌、高质量的试剂，并在实验中进行常规无菌操作，减少操作人员带入的真菌污染；
定期对实验室进行清洁和消毒，保持工作环境的无菌。定期消毒工作环境，特别是操作台和培养箱，避免真菌的滋生。定期更换培养器具，特别是培养瓶和培养皿，避免真菌滋生；
使用高质量的培养基和抗生素，抑制真菌的生长；
定期检测细胞株的支原体污染情况，新购买的细胞株进行隔离培养，并进行支原体检测，确保细胞株的无菌性。