产品概述
EnkiLife FITC标记试剂盒包含标记抗体蛋白的多个组分，如高性能的FITC荧光染料、纯化用超滤离心管、洗脱标记缓冲液、标记蛋白保存液等，可轻松可靠地标记抗体、蛋白质和其他分子，以便用作荧光探针。
产品特点
- 快速：标记反应时间需约30分钟，同时兼顾标记效果和标记效率
- 简便：每只染料试剂已优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，按照步骤操作即可获得良好效果
- 灵活：对大规格试剂盒中的染料进行分装，批次性能一致，方便多次使用
- 标记效果突出：优化的标记缓冲液使标记位点相对固定，增强标记后抗体的同质性
- 胺特异性标记：FITC上的活性基团能高效地结合抗体或其他纯化蛋白质上的伯胺基团，从而实现染料和抗体的共价标记结合
- 标记蛋白：主要针对IgG类抗体，和IgG抗体类似大小及性质的蛋白也可标记
染料简介
FITC是一种经典的荧光染料，应用广泛，流式、免疫荧光等都通用，它有两种异构体形式，即5'-FITC和6'-FITC，通常作为标记蛋白用染料时，使用的是其混合形式。荧光素有很多优点：它量子产率很好，高达到0.94，因此初亮度非常明亮；它的激发峰是495nm，和常用的激光束488nm(argon-ion laser)很匹配。它的弱点是光稳定性欠佳，长时间照射荧光易淬灭，另外它的荧光对pH敏感，在偏酸性条件下荧光变弱。
FITC染料性质
基本特性
类似染料：ATTO 488, Alexa Fluor® 488, Spark Blue™ 515 Cy®2, DyLight® 488,FAM, Fluorescein-X
常用激发光源：488 nm
最大激发波长：495 nm
最大发射波长：520 nm
摩尔消光系数：68000 L/(mol·cm)
量子产率：0.92
外观：黄色固体
FITC染料光谱图
试剂盒规格
| 产品组分 | 不同规格组分含量 | 储存温度 | ||
|---|---|---|---|---|
| 40μg抗体 | 200μg抗体 | 2mg抗体 | ||
| 活化的FITC | 1管 | 5管 | 5管 | 开封后-20℃避光保存 |
| 50KDa超滤管* | 1 set** | 1 set** | 1 set** | RT |
| 标记缓冲液F | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 2~8℃ |
| 1×PBS (pH 7.4) | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 2~8℃ |
| DMF | 100 μL | 100 μL | 100 μL | 2~8℃, 避光 |
| 标记蛋白保存液 | 200 μL | 1 mL | 5 mL | 2~8℃ |
| 标记抗体量 | 每管染料可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 | 每管染料可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 | 每管染料可标记100~400μg抗体 推荐标记200μg抗体 | |
* 超滤管分子量截留值50KDa
** 1 set = 1个超滤管和收集管
标记原理
在一定的化学反应条件下，荧光染料活化基团专一性与抗体蛋白上的伯胺基反应，形成稳定的酰胺键，从而实现与抗体蛋白的标记偶联。
标记原理示意图
常规标记流程
- 1、超滤换液浓缩
- 2、标记反应
- 3、纯化
- 4、DOL计算，收集保存
标记流程图
其他问题
参见常见问题答疑
