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直接检测和间接检测

常见的免疫检测技术中，根据所使用的试剂类型和检测原理，检测技术可分为直接检测和间接检测技术。如果荧光染料或可视化标记物标签直接连接到一抗上，则称为直接检测。如果一抗是未标记的，而标记物标签连接到另一分子上，例如二抗，则称为间接检测。直接检测技术和间接检测技术在不同的免疫学检测应用中能够发挥不同的作用，两种技术都有其优点和缺点，在选择最适实验方法时需要加以考虑。

直接法和间接法的比较：

直接法和间接法用于不同的免疫检测技术领域的举例说明

1，荧光免疫组织化学

使用基于荧光素多重免疫检测方案如下图所示，说明使用直接法进行多重免疫荧光的优势。（除了下图所展示的实验方案之外，还有其他形式的多重免疫荧光实验技术）

使用间接染色方法进行多重荧光免疫组织化学利弊如下：

优点：

1）相较于使用偶联物进行直接检测亮度更强；

2）与标准染色实验步骤类似与标准染色实验步骤类似（甲醛固定的免疫荧光实验步骤）；

3）使用常见试剂，无需特殊成像设备；

缺点：

1）可用的一抗或二抗种属类型有限；

2）需要单独进行二抗孵育步骤；

针对其缺点的解决方案：EnkiLife可提供多种荧光标记的多种二抗类型，或提供标记试剂盒及标记技术服务，助力基于二抗的多重免疫检测技术的发展。

如果使用间接法检测且一抗是针对不同的抗原靶标，但是抗体来源的种属都是一样的，例如都是小鼠源一抗，二抗标记相对应的荧光染料，无论是什么二抗种属，都不能有效检测，而直接检测方法则避免了这个问题。图示如下：

使用直接IF染色法和偶联不同荧光团的抗体的利弊如下：

优点：

1）允许对在同一种属的不同抗体进行多重分析；

2）比间接检测更高效（无二抗检测步骤）；

3）类似于标准染色实验步骤（甲醛固定的免疫荧光实验步骤）；

4）使用常见试剂，无需特殊成像设备；

缺点：

1）亮度上比使用二抗进行的间接检测暗；

2）可用荧光团有限（通常需要更高亮度的荧光团）；

3）某些荧光团无商业形式提供，需要单独标记；

EnkiLife提供多种荧光标记试剂盒，标记方法简单，且具备较好的成本优势，可解决此种限制。

2、流式细胞术(FC)

使用流式细胞术检测的靶标通常是位于细胞表面的蛋白，生物体内不同的细胞具有不同的细胞表面蛋白的表达分布特征，例如中性粒细胞或者单核细胞，通常高表达FC受体（CD16/CD32）, 且很多细胞表面蛋白是属于免疫球蛋白超家族成员，使用间接检测方式，即使用荧光标记的二抗的方式通常会产生很高的背景信号。如果检测一种靶标，这种负面影响通常不会干扰实验结果的判断。但是流式细胞术的最大优势是其高通量多色实验的数据分析能力，由于使用二抗带来的影响，使用间接法检测多种靶标在细胞表面的表达特征或进行流式分选几乎变得不可能。

使用荧光标记的二抗进行流式检测通常会存在较大的非特异性染色或背景信号，如下图所示。

Hansun  Hansun是EnkiLife的蛋白标记专家，精通免疫学、各种标记技术和流式检测，致力于蛋白的精准标记，赋能科技突破。每一个蛋白，都值得被“看见”。