FAQ｜样本处理
1. 样本数量
问：试剂盒能检测多少个样本？
答：
96T试剂盒：
标准品和样本都做单孔，最多检测88个样本；标准品做复孔，样本做单孔，最多检测80个样本；标准品做单孔，样本做复孔，最多检测44个样本；标准品和样本都做复孔，最多检测40个样本。
48T试剂盒：
标准品和样本都做单孔，最多检测40个样本；标准品做复孔，样本做单孔，最多检测32个样本；标准品做单孔，样本做复孔，最多检测20个样本；标准品和样本都做复孔，最多检测16个样本；如果做3复孔，检测的样本数量会相应减少。
2. 高脂样本处理
问：如何处理高脂样本？
答： 建议5000xg离心，静置10min后取中层较澄清液体，再用≥5000xg离心取中下层清液用于检测。原因：高脂样本含有脂肪，使得样本溶液不呈均质状态，若直接上样会影响抗原抗体的结合，导致测值不准确。
3. 采血管选择
问：如何选择采血管和处理样本？
答： 常规的不含涂层的采血管(红色管盖)一般采血后室温下放置1小时或2~8℃过夜，即可分离出血清，然后进行离心处理。
抗凝管(绿色、紫色管盖)一般采血后应立即轻柔颠倒混匀数次(一般为5至10次)，静置5-10min后即可离心处理，最长不超过30min。
4. 采血量
问：大小鼠的采血量应该是多少？
答：
小鼠采血
致死采血：成年小鼠的采血量通常为0.8-1.2mL，理论上可以获得的血清/血浆量为0.3-0.5mL。常规采血方法包括摘眼球采血和断头采血。
不致死采血：眼眶静脉丛采血是常用的不致死采血方法，小鼠采血量为0.1-0.2mL。
大鼠采血
致死采血：成年大鼠的采血量通常为3-8mL，理论上可以获得的血清/血浆量为1.5-3mL。常规采血方法包括断头采血、股动脉采血和心脏采血等。
不致死采血：眼眶静脉丛采血同样适用于大鼠，采血量为0.4-0.6mL。
5. 避免溶血
问：如何避免溶血的产生？
答： 正确采血：选择合适的静脉，避免止血带过紧或时间过长，回抽压力不宜过大。
使用合格器具：例如，使用国际标准真空采血管。
轻柔操作：采血后避免剧烈摇晃，轻柔颠倒混匀标本。
及时处理：采血后尽快分离血清或血浆，并及时送检。
适当离心：控制离心速度和时间，避免过度离心。
避免乙醇消毒。
避免重复进针和气泡进入。
6. 常用匀浆方法
问：如何进行组织/细胞样本的匀浆？
答： l
玻璃匀浆器匀浆：
适用范围：适用于柔软的组织如脑组织或细胞培养物。
方法：将组织称重，剪碎呈1cm³大小，倒入玻璃匀浆管中，加入匀浆介质，左手持匀浆管将下端置于冰浴中，右手将匀浆器的活塞垂直插入套管中，进行上下或前后的匀浆操作。匀浆次数通常为10-20次，每次匀浆后可以让组织稍微恢复形状，以便进行下一次匀浆，直至组织充分匀浆；
手工匀浆：
适用范围：适用于少量样本的处理。
方法：将组织称重，剪碎呈1cm³大小，倒入研钵中，加入液氮进行研磨，充分研磨后，加入匀浆介质，再将制好的匀浆吸取到EP管中备用。
组织研磨仪匀浆：
适用范围：适用于高通量样本处理。
方法：将组织称重，剪碎呈1cm³大小，然后装入EP管，加入匀浆介质。组织研磨仪在低温条件下，60 Hz，90 s研磨1-3次，直至组织充分匀浆。皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当增加匀浆次数。
7. 冻融操作
问：如何进行组织/细胞样本的反复冻融？
答：
组织样本：研磨后于-80℃冷冻1小时或液氮中30分钟，然后在30℃水浴中轻微振荡使其快速融化，重复1-2次。
细胞样本：按上述冻融的操作重复冻融2-3次。若为膜蛋白可超声辅助破碎，但需要控制好超声的温度和频率。
样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐：PMSF。
8. 超声操作
问：如何进行超声操作？
答： 使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞
（超声参数设置参考：用Soniprep150超声波发生器以振幅14μm超声处理30秒，破碎细胞；或者用超声破碎仪，200W，2秒/次，间隙3秒，总时间3-5分钟或者400A，5秒/次，间隙10秒，反复3-5次）。
于2-8℃，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。
注意：超声过程中注意控制温度；超声探头不要触及容器底部或壁。
9. 裂解液使用
问：可以使用商品化/自配的裂解液吗？
答： 不建议使用，因为不同品牌的成分和裂解效率可能存在显著差异。特别是含有SDS等表面活性剂的试剂，可能会破坏目标蛋白的天然结构，导致检测结果的准确性降低，甚至产生假阴性。此外，引入新的溶剂可能带来未知的基质干扰，增加背景噪声，进而影响测量值的可靠性。
10. 样本保存
问：样本应如何保存？
答： 样品收集后若在48内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物，室温混匀后使用。
11. rpm与g换算
问：rpm与g之间的换算公式是什么？
答： rpm与g之间的换算公式取决于离心机的类型和转子的几何特性。
对于大多数台式离心机，可以使用以下公式进行换算：
rcf(g) = 1.118 × 10−5 × r (cm) × (rpm)2
其中：rcf 是相对离心力，单位是"g"；r 是离心机转轴中心与离心管中心的距离，单位是"cm"。由于离心管的位置由转子（rotor）决定；rpm 是转速，单位是每分钟转数。