产品概述
Enkilife生物素标记试剂盒提供了目前市面上几种常用的生物素类型，所有生物素标记试剂盒包含标记所需全部试剂，用于含有伯氨基的蛋白、抗体的标记，本试剂盒提供的组分配套默认标记抗体或与抗体类似大小的蛋白。
产品特点
- 快速：标记反应时间需约30分钟，同时兼顾标记效果和标记效率
- 简便：每管生物素试剂已优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，按照步骤操作即可获得良好效果
- 灵活：对大规格试剂盒中的生物素进行分装，批次性能一致，方便多次使用
- 标记效果突出：优化的标记缓冲液使标记位点相对固定，增强标记后抗体的同质性
- 生物素种类丰富：提供多种类型生物素，可应对多种应用需求
生物素简介
生物素，也称为维生素 H 、辅酶 R、维生素 B7，是一种水溶性物质。其分子核心结构由一个脲基环和一个四氢噻吩环连接而成。生物素和抗生物素蛋白（亲和素或链霉亲和素）之间的相互作用是非放射性纯化、检测、固定化、标记、病毒载体靶向和药物靶向系统中的有用工具。生物素和亲和素之间的超常亲和力是已知的蛋白质与配体之间最强的非共价相互作用之一，两者结合非常迅速，一旦形成，便不受pH值、温度、有机溶剂和其他变性剂的影响。
除了与抗生物素蛋白有很强的亲和力外，生物素还具有两个特点，使其成为标记蛋白质和大分子的理想分子。首先，生物素比球状蛋白质相对小，从而最大限度地减少了对许多蛋白质的显著干扰，并允许多个生物素分子与单个蛋白质结合，从而最大限度地提高检测能力。根据使用场景的不同，越来越多的不同类型的生物素及其衍生物被开发出来，如含不同活化基团，不同溶解度，不同间隔臂长度，及生物胞素、脱硫生物素等不同的生物素衍生物， 极大的拓展了生物素的应用范围。
在许多蛋白质研究应用中，通常使用亲和素偶联物检测或纯化生物素标记的蛋白质，包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白质印迹分析、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和其他亲和纯化方法、细胞表面标记和流式细胞术（FC）/细胞分选（FACS）。
不同生物素性质及选择
| 生物素类型 | 间隔臂(spacer arm)长度 | 溶解度 | 主要特性 | 对应kit货号 |
|---|---|---|---|---|
| Sulfo-NHS-Biotin | 13.5埃 | 水溶性 | 膜不透性、短臂，带磺基，水溶液中溶解度高 | RE80002q |
| Sulfo-NHS-LC-Biotin | 22.4埃 | 水溶性 | 膜不透性，中等臂长，带磺基，水溶液中溶解度高 | RE80002s |
| Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin | 30.5埃 | 水溶性 | 膜不透性，增强的臂长，带磺基，水溶液中溶解度高 | RE80002u |
| Sulfo-NHS-SS-Biotin | 24.3埃 | 水溶性 | 膜不透性，可选择性切割 | RE80002v |
| NHS-PEG4-Biotin | 29.0埃 | 水溶性 | PEG化，防蛋白聚集 | RE80002w |
- 当需要最终标记物分子量尽可能小，选择短臂生物素标记试剂盒。
- 当下游应用需要使用还原剂切割生物素标签时，选择Sulfo-NHS-SS-Biotin 标记试剂盒。
- 当需要最大限度提高蛋白质的溶解度，防止蛋白聚集，选择NHS-PEG4-Biotin 标记试剂盒。
- 当希望最终结合空间位阻较小，选择长臂生物素标记试剂盒，根据结合特点选择合适的臂长。
试剂盒规格
| 产品组分 | 不同规格组分含量 | 储存温度 | ||
|---|---|---|---|---|
| 40μg抗体 | 200μg抗体 | 2mg抗体 | ||
| 活化的生物素 | 1管 | 5管 | 5管 | 开封后-20℃避光保存 |
| 50KDa超滤管* | 1 set** | 1 set** | 1 set** | RT |
| 标记缓冲液B | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 2~8℃ |
| 1×PBS (pH 7.4) | 10 mL | 10 mL | 10 mL | 2~8℃ |
| DMF | 100 μL | 100 μL | 100 μL | 2~8℃, 避光 |
| 标记蛋白保存液 | 200 μL | 1 mL | 5 mL | 2~8℃ |
| 标记抗体量 |
每管生物素可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 |
每管生物素可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 |
每管生物素可标记100~400μg抗体 推荐标记200μg抗体 |
|
* 超滤管分子量截留值50KDa
** 1 set = 1个超滤管和收集管
标记原理
在一定的化学反应条件下，生物素活化基团专一性与抗体蛋白上的伯胺基反应，形成稳定的酰胺键，从而实现与抗体蛋白的标记偶联。
常规标记流程
- 步骤一、超滤换液浓缩
- 步骤二、标记反应
- 步骤三、纯化
- 步骤四、收集保存
其他问题
参见常见问题答疑
