Flag-His-Tag快速检测卡
蛋白表达快速检测专用 · 10-15分钟出结果 · 无需任何仪器设备
产品概述
Flag-His-Tag快速检测卡采用胶体金侧向层析技术，基于双抗体夹心免疫检测原理开发而成。检测卡的层析膜上固定有鼠抗Flag-Tag单克隆抗体作为检测线，以及山羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线；金标垫上则包被了胶体金标记的鼠抗His-Tag单克隆抗体。
当含有Flag-His-Tag融合蛋白的样品滴加至样品垫后，通过毛细作用向吸水纸方向移动。样品中的目标蛋白首先与金标抗体结合形成复合物，随后被检测线上的抗体捕获并富集，形成肉眼可见的紫红色条带。本产品检测灵敏度可达4ng/mL，在4ng/mL至500ng/mL范围内，条带颜色深度与蛋白浓度呈正相关；当蛋白浓度超过500ng/mL直至10μg/mL时，检测线仍能保持高强度显色，不会因抗原过量而出现明显的显色减弱现象。
核心优势
与传统方法的时间对比
使用本产品可将蛋白检测时间从数小时缩短至仅需15分钟！
产品信息
| 货号 | 规格 | 保存条件 | 保质期 |
|---|---|---|---|
| RA10085 | 10T | 常温干燥 | 12个月 |
| RA10085 | 100T | 常温干燥 | 12个月 |
组成成分：独立铝箔袋包装的Flag-His-Tag检测卡、滴瓶装层析液、详细产品说明书
广泛应用场景
- 重组蛋白表达克隆筛选：快速鉴定大量转化子中的高表达阳性克隆，避免在低表达克隆上浪费时间和试剂
- 表达条件优化实验：快速比较不同诱导温度、诱导时长、诱导剂浓度对蛋白表达量的影响
- 蛋白纯化过程追踪：实时监测上样液、穿透液、洗脱液和收集液中的目标蛋白含量
- 真核细胞转染效率检测：快速评估不同转染试剂和转染方法对目的蛋白表达的影响
- 蛋白样品质量验证：快速确认蛋白样品中标签的完整性，为后续功能实验提供质量保障
- 大规模生产质控：适用于重组蛋白药物、工业酶制剂等生产过程中的中间产物快速检测
操作流程
- 准备工作：从密封铝箔袋中取出检测卡，水平放置于干燥的实验台面上；根据样品预期浓度进行适当稀释，确保待测蛋白浓度处于4-500ng/mL的最佳检测区间
- 样品加载：使用微量移液器准确吸取20μl稀释后的待测样品，缓慢滴加到检测卡的样品孔中
- 层析启动：立即向样品孔中滴加50μl配套层析液（滴瓶垂直滴加约2滴）
- 结果判读：室温下静置10-15分钟后观察并记录结果，超过20分钟后观察到的结果不具有参考价值
样品稀释指南：对于浓度已知的样品，直接稀释至约100ng/mL即可；对于浓度未知的细菌、哺乳动物、酵母或昆虫细胞裂解液，建议先进行50倍稀释。如果初次检测结果显示检测线显色极弱或无显色，且预期蛋白表达量较高时，应将样品进一步稀释100倍后重新检测，以排除高浓度抗原导致的前带现象。不建议使用低于10倍的稀释倍数，以免样品中复杂成分干扰检测结果。
结果判读
质控线(C)和检测线(T)同时出现紫红色条带，表明样品中存在Flag-His-Tag融合蛋白。在4-500ng/mL的线性范围内，检测线颜色越深代表蛋白浓度越高。
仅质控线(C)出现紫红色条带，检测线(T)无明显显色，表明样品中不含Flag-His-Tag融合蛋白，或其浓度低于4ng/mL的检测下限。
质控线(C)未出现紫红色条带，无论检测线(T)是否显色，均表明本次检测无效。可能原因包括试剂失效、操作不当或层析液滴加不足。
常见试剂兼容性
本产品对多种实验室常用缓冲液成分具有良好的耐受性，可直接检测大多数常规制备的蛋白样品，无需进行额外的样品处理。
| 试剂名称 | 浓度上限 |
|---|---|
| NaCl | 1.5M |
| KCl | 1.5M |
| Urea | 0.4M |
| Triton X-100 | 1% |
| Tween-20 | 1% |
| SDS | 0.20% |
| 试剂名称 | 浓度上限 |
|---|---|
| NP-40 | 1% |
| CHAPS | 1.0% |
| EDTA | 7.5mM |
| 甘油 | 10% |
| RIPA裂解液 | 100% |
特别提示：本产品可完全兼容100%浓度的RIPA裂解液，使用RIPA裂解液制备的细胞样品可直接进行检测，无需进行透析或其他处理步骤。
常见问题及解决
| 现象 | 可能的原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 检测线无可见条带 | 样品中不含目标蛋白 样品浓度低于检测下限 样品浓度过高导致前带现象 |
确认表达载体和检测卡匹配 降低稀释倍数至10倍后重测 对样品进行更高倍数稀释后重测 |
| 检测线显色非常浅 | 样品浓度接近检测下限 样品浓度过高导致前带现象 层析反应时间不足 |
降低稀释倍数后重新检测 进一步稀释样品后重新检测 延长反应时间至15分钟后观察 |
| 质控线无可见条带 | 操作步骤有误 检测卡已过有效期 检测卡保存不当受潮 层析液滴加量不足 |
严格按照说明书重新操作 更换有效期内的新检测卡 确保检测卡于常温干燥处保存 滴加足量层析液(约2滴) |
注意事项
- 本产品仅用于科学研究目的，严禁应用于人体临床诊断或治疗。
- 检测卡一旦从铝箔袋中取出，应在1小时内完成使用，长时间暴露在空气中可能导致试剂受潮失效。
- 正确的样品稀释是获得准确检测结果的关键，务必根据样品的预期浓度选择合适的稀释倍数。
- 当检测线显色异常微弱且与预期表达水平不符时，应高度怀疑高浓度抗原导致的前带现象，需进一步稀释样品后重新检测。
- 不建议使用低于10倍的稀释倍数，因为高浓度的细胞裂解液成分可能会干扰免疫反应，导致检测结果不准确。
- 请严格按照说明书规定的时间判读结果，过早或过晚判读都可能导致错误的结论。
- 不同生产批次的产品可能存在微小的性能差异，请勿混合使用不同批次的检测卡和层析液。
- 实验过程中产生的所有废弃物应按照实验室生物安全管理规定进行分类处理。
