产品概述
EnkiLife R-PE标记试剂盒包含标记抗体蛋白的多个组分，如优选的已经活化冻干的 R-PE荧光染料、纯化用超滤离心管、标记缓冲液等、标记化学试剂、标记蛋白保存液等，可轻松可靠地标记抗体，以便用作荧光探针。
产品特点
- 定向偶联：优化的定向偶联技术，标记抗体的均一性较好，且提高了标记结合效率。
- 快速：步骤简单，最快3~4h即可高效完成标记。
- 简便：每只染料试剂已优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，抗体样本符合标记条件情况下无需超滤，按照步骤混合相应试剂，进行简单操作可得到较好效果。
- 灵活：对大规格试剂盒中的染料进行分装，固体染料形式批次稳定性能一致，方便多次使用。
- 标记效果突出：活化染料具备加长臂，有效避免抗体和荧光染料间的空间位阻，保护抗体活性的同时，获得更高标记效率。
- 高性能荧光染料：优选的高性能荧光染料，量子产率高，荧光亮度大，能有效提高检测灵敏度，且化学性质较为稳定，能适应后续多种应用场景，如固定细胞样本的检测。
- 实验试剂全覆盖：配备标记保存液，从标记到保存全流程无需额外配备试剂，一个盒子搞定全部标记过程，省心，省事。
染料简介
R-Phycoerythrin (R-PE,R-藻红蛋白）是一种从红藻中分离出来的藻胆蛋白，具有极高的量子产率，可发出明亮的橙红色荧光。它是一种优异的荧光标记染料，广泛应用于生物检测领域。藻红蛋白主要有两种形式，即R-PE和B-PE，两者的光学特性有些差别，本试剂盒使用的是R-PE。R-藻红蛋白主要吸收峰在565nm，次要峰值在496nm和545nm。不同物种的R-PE的吸收光谱有一定差异。R-PE由α、β和γ亚基组成，以(αβ)6γ的形式存在，完整的R-PE 的分子量约为 240000Da。
R-PE染料性质
基本特性
类似染料：B-PE
常用激发光源：488nm
最大激发波长：496 nm，565 nm
最大发射波长：575 nm
摩尔消光系数：1960000 L/(mol·cm)
量子产率：0.82
外观：冻干的红色固体
试剂盒规格
| 产品组分 | 不同规格组分含量 | 储存温度 | ||
|---|---|---|---|---|
| 40μg抗体 | 200μg抗体 | 1mg抗体 | ||
| 活化的R-PE | 1管 | 1管 | 5管 | -20℃, shading light |
| 50KDa超滤管* | 1 set** | 1 set** | 1 set** | RT |
| 标记缓冲液L | 2 mL | 2 mL | 2 mL | 2~8℃ |
| 抗体修饰试剂 | 60 μL | 60 μL | 60 μL | -20℃, shading light |
| 封闭试剂 | 300 μg | 300 μg | 300 μg | -20℃, shading light |
| DMSO(溶解封闭试剂) | 50 μL | 50 μL | 50 μL | -20℃, shading light |
| 标记蛋白保存液 | 200 μL | 1 mL | 5 mL | 2~8℃ |
| 标记抗体量 | 每管染料可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 | 每管染料可标记50~200μg抗体 推荐标记100μg抗体 | 每管染料可标记50~200μg抗体 推荐标记100μg抗体 | |
* 超滤管分子量截留值50KDa
** 1 set = 1个超滤管和收集管
标记原理
在一定的化学反应条件下，荧光染料活化基团专一性与化学修饰后的抗体蛋白特定氨基酸残基反应，从而实现与抗体蛋白的定点偶联。
常规标记流程
- 1、抗体超滤换液浓缩（可选）
- 2、抗体活化修饰
- 3、标记反应
- 4、封闭保存
R-PE染料标记抗体蛋白应用举例
流式免疫细胞分型
R-PE标记anti Human CD25进行免疫细胞分型（人外周血样本），检测标记组合（例如：CD4-FITC+CD8-APC+CD25-R-PE（IL-2受体，调节性T细胞标志）精准识别CD25低表达靶点，避免弱信号漏检。
肿瘤免疫
R-PE标记anti CD68实现红绿组合（抗PD-L1 Fluor 488+CD68-R-PE+DAPI），减少通道串扰，有效计算肿瘤基质中CD68阳性巨噬细胞与PD-L1阳性细胞的空间共定位率。
ELISA
包被自身抗原（如dsDNA）→ 加患者血清 → R-PE标记抗人IgG二抗用于自身抗体检测试剂盒开发，使用荧光酶标记检测，可有效提高检测灵敏度。
细胞胞吞作用研究
EGFR-R-PE抗体 → 4℃结合细胞表面 → 37℃温育激活内化 → 流式检测信号衰减，用于抗体介导的胞吞作用追踪。
生物标记检测
Streptavidin-R-PE+ Biotinylated抗体提高弱表达靶点（如CTLA-4）30倍检出率。
液相芯片多因子检测
应用于液相芯片，单孔同步检测12种细胞因子（不同微球编码+R-PE检测抗体统一信号）实现多因子检测。
其他问题
参见常见问题答疑
