产品概述
EnkiLife APC标记试剂盒包含标记抗体蛋白的多个组分，如优选的已经活化冻干的 APC荧光染料、纯化用超滤离心管、标记缓冲液等、标记化学试剂、标记蛋白保存液等，可轻松可靠地标记抗体，以便用作荧光探针。
产品特点
- 定向偶联：优化的定向偶联技术，标记抗体的均一性较好，且提高了标记结合效率。
- 快速：步骤简单，最快3~4h即可高效完成标记。
- 简便：每只染料试剂已优化设计好对应的抗体量，无需繁琐计算，抗体样本符合标记条件情况下无需超滤，按照步骤混合相应试剂，进行简单操作可得到较好效果。
- 灵活：对大规格试剂盒中的染料进行分装，固体染料形式批次稳定性能一致，方便多次使用。
- 标记效果突出：活化染料具备加长臂，有效避免抗体和荧光染料间的空间位阻，保护抗体活性的同时，获得更高标记效率。
- 高性能荧光染料：优选的高性能荧光染料，量子产率高，荧光亮度大，能有效提高检测灵敏度，且化学性质较为稳定，能适应后续多种应用场景，如固定细胞样本的检测。
- 实验试剂全覆盖：配备标记保存液，从标记到保存全流程无需额外配备试剂，一个盒子搞定全部标记过程，省心，省事。
染料简介
别藻蓝蛋白(Allophycocyanin，简称为APC)是从螺旋藻（一种蓝绿藻）中分离的藻胆蛋白，分子量 104 kDa，由两种亚基α和β聚合形成(αβ)3结构，有很高的量子产率。可被 594 nm、633 nm 激发发光，在650 nm 处吸收峰最大，在660nm 处荧光发射峰最大。APC荧光亮度很高，是流式检测中最常用的荧光染料之一。
APC染料性质
基本特性
类似染料：Alexa Fluor 647,Cy5
常用激发光源：627-640 nm
最大激发波长：651 nm
最大发射波长：660 nm
摩尔消光系数：700000 L/(mol·cm)
量子产率：0.68
外观：冻干的蓝色固体
试剂盒规格
| 产品组分 | 不同规格组分含量 | 储存温度 | ||
|---|---|---|---|---|
| 40μg抗体 | 200μg抗体 | 1mg抗体 | ||
| 活化的APC | 1管 | 1管 | 5管 | -20℃, shading light |
| 50KDa超滤管* | 1 set** | 1 set** | 1 set** | RT |
| 标记缓冲液L | 2 mL | 2 mL | 2 mL | 2~8℃ |
| 抗体修饰试剂 | 60 μL | 60 μL | 60 μL | -20℃, shading light |
| 封闭试剂 | 300 μg | 300 μg | 300 μg | -20℃, shading light |
| DMSO(溶解封闭试剂) | 50 μL | 50 μL | 50 μL | -20℃, shading light |
| 标记蛋白保存液 | 200 μL | 1 mL | 5 mL | 2~8℃ |
| 标记抗体量 | 每管染料可标记20~40μg抗体 推荐标记20μg抗体 | 每管染料可标记50~200μg抗体 推荐标记100μg抗体 | 每管染料可标记50~200μg抗体 推荐标记100μg抗体 | |
* 超滤管分子量截留值50KDa
** 1 set = 1个超滤管和收集管
标记原理
在一定的化学反应条件下，荧光染料活化基团专一性与化学修饰后的抗体蛋白特定氨基酸残基反应，从而实现与抗体蛋白的定点偶联。
常规标记流程
- 1、抗体超滤换液浓缩（可选）
- 2、抗体活化修饰
- 3、标记反应
- 4、封闭保存
APC标记试剂盒应用效果
APC标记试剂盒标记抗体流式多色检测分析和其他厂家对比(FC)
使用APC标记试剂盒（RE80006p）和FITC标记试剂盒（RE80001p）对两种抗体进行标记。同时，使用相应的国际品牌流式抗体作为对照。制备小鼠脾细胞悬液并进行红细胞裂解后，每个测试使用10^6个细胞，进行流式细胞术检测。
抗体：
B公司：0.05ug APC-抗小鼠CD4（GK1.5）和0.2ug FITC-抗小鼠CD3（B公司产品）
EnkiLife：0.05ug APC-抗小鼠CD4（GK1.5）和0.2ug FITC-抗小鼠CD3（使用EnkiLife两种标记试剂盒制备）
结论：使用APC标记试剂盒和FITC标记试剂盒制备的抗体染色显示出清晰的信号，信噪比高，与国际品牌抗体结果一致。
其他问题
参见常见问题答疑
