免疫组织化学——融合免疫学、组织化学与显微成像的经典生物检测技术
IHC技术主要以石蜡组织切片或冰冻组织切片为检测样本，其核心流程包括抗原抗体反应与信号放大。首先，组织切片中的目标抗原与特异性抗体（一抗）结合；随后，标记有酶的二抗与一抗结合；最后通过显色底物，将微观的免疫反应转化为显微镜下可见的颜色，从而实现目标分子的可视化。例如，在应用最广泛的HRP‑DAB体系中，HRP催化DAB形成不溶性棕褐色沉淀，使目标抗原的位置能够通过明场显微镜直接观察。根据报告酶与抗体的连接方式不同，IHC可采用直接法、间接二抗法和聚合物法等多种检测模式。
原位定位——这是IHC最核心的独有价值。可明确蛋白表达的具体位置，区分胞核、胞浆、胞膜表达模式，同时区分肿瘤组织、正常组织、间质组织的表达差异。 特异性识别——精准判定目标蛋白在待测组织中是否表达，排除基因水平检测的假阳性干扰，直接验证蛋白层面的真实表达情况。
基于原位、可视、可量化的技术特性，IHC被广泛应用于基础科研、临床病理、药物研发三大核心领域。
下面为IHC染色工作流程图，详细操作流程请参考完整技术手册。
关键技术要点
• 不建议进行抗原修复的情况：新鲜冰冻组织样本经短暂固定不会遮蔽抗原表位，因此无需抗原修复处理。
• 组织切片需全程保湿：石蜡切片完成脱蜡水化操作后，后续抗原修复、封闭、抗体孵育、洗涤等全部实验流程均需保证组织维持湿润状态，禁止组织切片暴露在空气中风干；组织一旦风干，会引发不可逆的非特异性蛋白吸附，造成大面积背景染色，严重时还会出现组织碎裂、脱片。
• 需设置阴阳对照：每组切片实验时必须同步配套设置适配实验体系的阳性对照切片与阴性对照切片，阳性对照用于验证整套染色流程、试剂及操作有效，阴性对照排除试剂、操作带来的假阳性干扰。
• 一抗选择：实验需选用经对应应用验证、适配目标检测靶标的一抗，通常选用多克隆抗体和单克隆抗体两种。挑选抗体时还需结合抗原表位特征，如空间构象、磷酸化等翻译后修饰类型，保证检测信号能够真实反映待测蛋白的生物学状态。实验优先采用抗体厂商推荐稀释比例，在此基础上进行浓度梯度滴定，最大化特异性染色信号，同时降低非特异背景染色。
染色实验开展前，逐项确认以下条件：
- ☑ 阳性、阴性对照切片与待测样本同步完成全部前处理流程
- ☑ 新抗体首次实验必须设置无一抗对照、同型对照
- ☑ 若采用 HRP/AP 酶促显色、ABC/LSAB 生物素放大体系，提前规划内源酶与生物素封闭步骤
- ☑ 多重荧光免疫组化实验提前筛查组织自发荧光，按需调整荧光染料选型
如需了解完整实验方案、抗体选型建议、样本制备要点、数据分析方法及常见异常解析，请下载完整的 IHC 技术手册。
下载完整手册 (PDF)内容基于EnkiLife 免疫组织化学 (IHC)技术手册