荧光染料 · 照亮微观细胞世界
细胞荧光染色技术手册
告别传统染色局限｜高特异・可定量・多靶点共定位，解锁单细胞亚细胞水平精准分析
检测原理
细胞荧光染色利用荧光探针与细胞内的特定成分（DNA、蛋白质、细胞器等）特异性结合，或在特定生理条件下发生反应，在激发光照射下发射特征荧光，借助荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等平台，实现细胞形态观测、靶点定位、表达定量与细胞状态分析。其核心流程覆盖荧光标记与信号检测两个环节：探针先通过特异性结合或生理响应富集于目标结构，再在激发光下发射特征波长荧光，经显微成像或流式检测完成可视化与定量。
01 · 结合
特异性富集
探针通过特异性结合或生理响应，富集于细胞目标结构。
02 · 激发
特征荧光发射
在激发光照射下，于特征波长处发射荧光信号。
03 · 检测
可视化与定量
经显微成像或流式检测，完成形态观测与表达定量。
优势
五大核心特性
高灵敏度与高对比度HIGH SENSITIVITY
荧光信号强度与靶标浓度成正比，特异性结合保证信号仅来自目标区域，背景极低。
原位定位IN-SITU LOCALIZATION
直接显示目标分子在细胞内的分布位置，区分细胞核、细胞膜、细胞质与各细胞器表达模式。
多靶点同步检测MULTIPLEX DETECTION
不同发射波段探针组合使用，一次实验同步观测多个细胞结构，支持多色共定位。
动态与定量分析LIVE & QUANTITATIVE
支持活细胞实时成像与流式定量，满足单细胞分析、动态机制研究、高通量药物筛选需求。
低毒性与高稳定性LOW TOXICITY
优化设计在多种 pH、温度与光照条件下保持稳定，适合长时间活细胞成像。
常见问题与解决方案
网页只展示部分常见问题与解决方案，详细请见细胞荧光染料技术手册
荧光信号弱或无信号是为什么？
原因染料浓度不足 / 降解；细胞密度过高或者细胞活力＜70%；孵育时间过短；缓冲液 pH 错误；固定、破膜处理过度。
解决①重配母液，避光 20℃ 冻存；②控制细胞密度 70–80%，细胞活力＞90%；③可将孵育时间延长至推荐上限，37℃ 条件加速染色；④采用 pH 7.2–7.4 的 PBS/HBSS 缓冲体系；⑤固定时间 ≤15 min，0.1–0.3% 破膜剂处理时间 ≤5 min。
背景信号过高是为什么？
原因染料残留未洗净；染料浓度过高产生聚集体；死细胞、细胞碎片带来干扰。
解决①洗涤 3–5 次，洗涤液添加 0.1% Tween20；②选用说明书推荐浓度下限进行染色；③染色前活死标记，流式采集时设置门控剔除死细胞碎片。
为什么光漂白严重？
原因激发光强度＞50%；曝光时间＞500ms；缺氧环境会加速荧光淬灭。
解决①激发光强度下调至 20–30%；②缩短曝光时间；③添加抗淬灭剂，密封封片；④4℃ 低温环境成像。
细胞毒性明显是什么原因？
原因染料用量超过推荐浓度 10 倍以上；DMSO 残留＞0.1%；光照诱导产生活性氧。
解决①严格遵循说明书浓度，必要时预实验优化；②保证 DMSO 终浓度＜0.1%，或离心去除溶剂；③染色全程避光，可添加抗氧化试剂。
光谱串扰（多色标记）怎么办？
原因荧光团发射峰重叠＜50 nm；同一束激发光同时激发多个荧光通道。
解决①选用发射峰间隔＞100 nm 染料组合，例 DAPI+TRITC+Cy5；②采用顺序扫描模式；③优化滤光片，选择带宽＜40 nm 的滤片。
详细技术手册
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