产品简介
MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,汉语化学名为3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝,是一种黄颜色的染料。MTT能够检测细胞存活和生长,其检测原理为:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物--甲瓒(Formazan),并沉积在细胞中,而死细胞则无此功能;二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490 nm或570 nm波长处(常用490 nm)测定其光吸收值(OD值),通过OD值的大小,可以判断活细胞的数量或活性,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与活细胞的数量或活性成正比。该方法的特点是灵敏度高,并且十分经济,已广泛应用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
使用说明
1、收集对数生长期的细胞,将细胞调整至所需的浓度接种至96孔板中,每孔体积200μL,96孔板边缘用无菌PBS或水填充,同时设置调零孔(培养基、MTT、DMSO),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解 介质、培养液、MTT、DMSO);
2、5% CO2,37 ℃培养细胞至处理结束后,每孔加入5 mg/mL MTT溶液20 μL,继续培养4h(若培养液中含能与MTT反应的成分,则需要去除培养液并用无菌PBS洗涤2-3次后再加入MTT溶液);
3、终止培养,小心吸去孔内培养液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃培养上清;
4、每孔加入150 μL二甲基亚砜(DMSO),置摇床上低速震荡10 min,使结晶充分融解;
5、选择490 nm波长,在酶联免疫检测仪上测定各孔的吸光值,并记录结果。
注意事项
1. 收到产品后首先检查包装是否完好,若有破损,请及时与我们联系;
2. 确认产品无任何问题后,如果不立即使用,请将产品及时放入-5~-20 ℃中避光保存,避免 反复冻融;融解后于2-8 ℃中避光保存,2周内有效;
3. MTT溶液在4 ℃、冰浴等较低温度情况下会凝固,可以20-25 ℃水浴温育片刻至全部融解后使用;
4. MTT溶液为黄色,长时间光照会导致失效,需避光保存,当颜色变为灰绿色时,请勿使用;
5. 为了您的健康和安全,请穿戴实验服、口罩和一次性手套进行操作;
6. 本产品仅供研究或进一步生产使用,不用于诊断或治疗。
