Western Blot常用试剂配方
专业实验试剂配置指南
常用裂解液配方
细胞骨架结合蛋白提取缓冲液
用于提取细胞骨架结合蛋白
Tris, pH 7.4 10 mM
NaCl 100 mM
EDTA 1 mM
EGTA 1 mM
NaF 1 mM
Na₄P₂O₇ 20 mM
Na₃VO₄ 2 mM
Triton X-100 1%
甘油 10%
SDS 0.1%
脱氧胆酸钠 0.5%
可溶性蛋白缓冲液
用于提取可溶性蛋白
Tris-HCl, pH 7.5 20 mM
EGTA (Ca²⁺螯合剂) 1 mM
RIPA裂解液
适用于核膜破碎提取核蛋白
Tris HCl, pH 8 50 mM
NaCl 150 mM
NP-40 1%
脱氧胆酸钠 0.5%
SDS 0.1%
NP-40裂解液
温和裂解液配方
Tris HCl, pH 8 20 mM
NaCl 137 mM
甘油 10%
NP-40 1%
EDTA 2 mM
常用试剂制备方法
100 mM EDTA母液
EDTA溶液制备
EDTA 1.86g
超纯水 40ml
NaOH 调pH至7.4
定容 50ml
保存条件 4℃
10×TBS浓缩液
TBS缓冲液浓缩液
Trizma HCl 24.23 g
NaCl 80.06 g
pH调节 7.6 (HCl)
定容 1L ddH₂O
TBST工作液（1L）
洗涤缓冲液
10×TBS 100 ml
超纯水 900 ml
Tween20 1 ml
磷酸酶抑制剂母液
防止蛋白去磷酸化
原钒酸钠 100mM
溶剂 双蒸水
pH调节 9.0 (HCl)
处理 煮至无色
保存条件 -20℃
温和剥离缓冲液（1L）
膜再生缓冲液
甘氨酸 15 g
SDS 1 g
Tween20 10 ml
pH 2.2
溶剂 超纯水定容至1L
强效剥离缓冲液（100ml）
强效膜再生缓冲液
10% SDS 20 ml
0.5M Tris HCl pH 6.8 12.5 ml
超纯水 67.5 ml
β-巯基乙醇 0.8 ml
抗体稀释液
用于稀释一抗或二抗
正常血清 100 µl
BSA 10 mg
TBS 900 µl
碳酸盐包被缓冲液（100mM, pH 9.6）
用于ELISA实验的包被缓冲液
Na₂CO₃ 3.03 g
NaHCO₃ 6.0 g
溶剂 超纯水定容至1L
PBS（pH 7.4, 500ml）
磷酸盐缓冲盐水
Na₂HPO₄ 1.16 g
KCl 0.1 g
KH₂PO₄ 0.1 g
NaCl 4 g
1 M Tris-HCl，pH 7.6
Tris缓冲液
Tris base 12.11 g
ddH2O 80 mL
pH调节 7.6 (HCl)
定容 100mL ddH2O
0.5 M Tris-HCl，pH 6.8
Tris缓冲液
Tris base 6.06 g
ddH2O 60 mL
pH调节 6.8 (HCl)
定容 100mL ddH2O
10% SDS
十二烷基硫酸钠溶液
SDS 1g
ddH2O 10mL
1.0%溴酚蓝
电泳指示剂
溴酚蓝 100mg
ddH2O 10mL
电泳相关试剂
SDS上样缓冲液（2X）
用于SDS-PAGE上样
0.5 M Tris-HCl，pH 6.8 2.5ml
甘油 2ml
10%SDS 4ml
0.1%溴酚蓝 0.5ml
ddH2O 至10mL
LDS上样缓冲液（4X）
用于LDS-PAGE上样
Tris HCl 0.666g
Tris base 0.682g
LDS 0.8g
EDTA 0.006g
甘油 4g
SERVA Blue G250（1%溶液） 0.75ml
酚红（1%溶液） 0.25ml
ddH2O 至10ml
Tris-甘氨酸SDS电泳缓冲液（10X）
SDS-PAGE电泳缓冲液
Tris base 29g
甘氨酸 144g
SDS 10g
ddH2O 至1000ml
Tris-甘氨酸非变性电泳缓冲液（10X）
非变性PAGE电泳缓冲液
Tris base 29g
甘氨酸 144g
ddH2O 至1000ml
MOPS SDS电泳缓冲液（20X）
MOPS缓冲系统电泳液
MOPS 104.6g
Tris base 60.6g
SDS 10g
EDTA 3g
ddH2O 至500ml
MES SDS电泳缓冲液（20X）
MES缓冲系统电泳液
MES 97.6g
Tris base 60.6g
SDS 10g
EDTA 3g
ddH2O 至500ml
Tricine SDS电泳缓冲液（10X）
Tricine缓冲系统电泳液
Tricine 179g
Tris base 121g
SDS 10g
ddH2O 至1000ml
转膜相关缓冲液
Tris-甘氨酸转膜缓冲液（25X）
Western转膜缓冲液
Tris base 18.2g
甘氨酸 90g
ddH2O 至500ml
Bis-Tis转膜缓冲液（20X）
Bis-Tris系统转膜缓冲液
Bicine 10.2g
Bis-Tris（游离碱） 13.1g
EDTA 0.75g
ddH2O 至125ml
封闭液与凝胶配方
5%脱脂奶粉封闭液
Western Blot封闭液
脱脂奶粉 2.5g
TBST或PBST 至50ml
3%BSA封闭液
Western Blot封闭液
BSA 1.5g
TBST或PBST 至50ml
分离胶配方
SDS-PAGE分离胶
溶液 6%/10%/12%/16%/20%
50%丙烯酰胺/Bis 3/5/6/8/10 ml
分离胶缓冲液 9.4 ml
10%SDS 250 ul
50%蔗糖 4 ml
ddH2O 7.8/5.8/4.8/2.7/0.75 ml
TEMED 6.25 ul
APS 625 ul
50%丙烯酰胺/Bis
凝胶储存液
丙烯酰胺 48.3g
Bis 1.7g
ddH2O 至100ml
分离胶缓冲液
分离胶缓冲液
Tris 30.3g
HCl 调pH至8.8
ddH2O 至250ml
50%蔗糖
蔗糖溶液
蔗糖 50g
ddH2O 至100ml
过硫酸铵（APS）（现配）
凝胶聚合引发剂
过硫酸铵 100mg
ddH2O 至2ml
4%浓缩胶
SDS-PAGE浓缩胶
50%丙烯酰胺/Bis 1ml
浓缩胶缓冲液 4.2ml
10%SDS 125ul
ddH2O 6.3ml
TEMED 5ul
APS 1ml
浓缩胶缓冲液
浓缩胶缓冲液
Tris 11.4g
HCl 调pH至6.8
ddH2O 至250ml