● 实验前务必验证试剂标签和批次号;只使用同一EnkiLife试剂盒的试剂。
● 保持每孔洗涤缓冲液体积一致,洗涤后在吸水纸上轻拍板底至干。
● 严格按照试剂盒说明书的孵育和显色时间操作。
● 更换不同试剂间的吸头,为不同溶液使用单独的容器。
● 检查稀释计算,必要时进一步稀释检测抗体或HRP-亲和素。
● 使用前保持TMB底物避光。
● 在准备和处理过程中仔细检查试剂标签。
● 确保所有洗涤缓冲液容器清洁且无污染物。
● 仔细阅读操作协议,严格按照说明书中指定的反应顺序操作。
● 确认有效性并按照推荐条件储存EnkiLife试剂盒以避免污染。
● 使用前将所有试剂和样本在室温下平衡。
● 使用校准的移液器和适当的一次性吸头。
● 使用计时器;典型的显色时间为15–30分钟。
● 按指示稀释浓缩液并控制洗涤量和洗涤次数。
● 使用纯净的中性水制备缓冲液。
回答:孔间一致性差可能是因为标准品稀释不当,工作试剂制备过早,样本添加后混合不充分,孵育、洗涤或显色条件不一致,孵育温度不稳定,交叉污染或重复使用耗材,板底有划痕、污垢或指纹,洗板机喷嘴堵塞或样本离心不足,样本降解或污染引起。
解决方案:
● 只使用推荐的稀释液并遵循EnkiLife指南。
● 使用前10分钟制备工作溶液。
● 充分混合并轻柔处理板以防止溅出。
● 保持实验间参数一致。
● 保持恒定的37°C环境。
● 更换吸头,每种试剂单独存放。
● 避免触摸板底并在读取前轻轻擦拭。
● 清理洗板机喷嘴并充分离心样本。
● 使用新鲜样本或低温储存。
● 移液枪加样时避免产生气泡。。
● 不同地区天气条件不同。操作前务必消除静电,防止影响孔间反应液液位,扩大差异。
| 问题描述 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 整板黄色或高背景 | 错误试剂或混合批次 | 使用同一EnkiLife试剂盒,检查批次号 |
| 所有孔无颜色 | 酶结合物失活 | 保持容器清洁,避免污染 |
| 所有孔颜色微弱 | 试剂未平衡至室温 | 在18-25°C平衡30分钟 |
| 重复性差 | 洗涤或孵育不一致 | 每次测试保持条件一致 |
| 读数低但颜色正常 | 波长过滤器错误 | 使用450nm |