生命科学科研大百科

多重免疫荧光结合酪酰胺信号放大（TSA）技术基于酶促信号级联放大原理，突破了传统方法的灵敏度与多靶点检测局限，近年来在肿瘤病理诊断领域的应用研究呈爆发式增长。

近年来，免疫检查点抑制剂联合化疗的方案显著改善了部分三阴性乳腺癌（TNBC）患者预后，但现有生物标志物存在明显不足，商用PD-L1检测试剂盒的抗体克隆号差异导致检测阈值不统一，且仅以“免疫细胞阳性率>1%”作为判断标准，无法区分PD-L1表达的细胞类型，导致患者筛选准确性有限，响应率仅8%-20%。因此，利用多重免疫荧光TSA技术解析PD-L1在不同免疫细胞上的表达特征，成为优化TNBC患者分层与治疗决策的关键方向。

肿瘤免疫微环境（TME）的细胞组成、功能状态及空间分布是决定肿瘤进展与免疫治疗疗效的核心因素，精准解析TME特征已成为肿瘤研究的关键方向。然而，传统研究工具存在显著局限：单一免疫组化（IHC）仅能检测单靶点，无法呈现细胞间的互作关系；流式细胞术虽可实现多参数分析，但需解离细胞，丢失了至关重要的空间信息；早期多重荧光染色技术则受限于信号强度低、抗体物种兼容性差等问题，难以满足临床样本分析需求。在此背景下，基于酪酰胺信号放大（TSA）技术的多重免疫荧光（mIHC）平台应运而生，为TME的“全景式”解析提供了可能。

Enklife TSA试剂盒的荧光染料具有优异的抗淬灭性能，无需在日光灯下进行避光操作，使用过程中也无需在暗环境中进行。不过，请注意避免试剂盒暴露在太阳光下直射。且染色玻片在4℃条件下通常可保存6至12个月。

癌症与宿主免疫系统的相互作用主要发生在肿瘤周围的反应性组织基质中，这一区域被称为肿瘤免疫微环境（TIME）。免疫检查点抑制剂的突破性临床应用，尤其是针对程序性死亡蛋白 1（PD-1，T 细胞共抑制受体）与程序性死亡配体 1（PD-L1，又名 B7-H1/CD274）的靶向疗法，不仅推动癌症免疫治疗进入新时代，更让 TIME 的功能解析成为科研与临床关注的核心。精准表征 TIME 的细胞组成、功能状态及分子互作网络，是筛选免疫治疗响应预测标志物的关键前提。而深入厘清 TIME 中各类免疫细胞的促癌 / 抗癌双重作用机制，及其与肿瘤细胞的动态关联，更能为开发新型免疫治疗策略提供核心支撑。然而，TIME 的高度异质性与低丰度免疫分子的检测难题，对传统分析技术提出严峻挑战，亟需高灵敏度、多重靶向的原位检测工具破解这一困境。

在组织原位蛋白检测领域,免疫组化（IHC）、普通免疫荧光（IF）与多重免疫荧光（TSA）是应用最广泛的三大技术。三者均以抗原抗体特异性结合为基础,但在检测通量、灵敏度、空间解析能力上存在本质区别,直接决定了其在科研与临床场景中的适用范围。本文将从技术核心、关键性能、适用场景三大维度,系统拆解三者的差异,为实验设计与技术选型提供精准参考。

本公司开发的TSA 试剂盒拥有国内外最全的产品组分，包括 TSA 标记荧光素、TSA 稀释液、3% H₂O₂、封闭液、一抗稀释液、抗体洗脱剂、HRP - 山羊抗兔 / 鼠 IgG、DAPI 染液及抗荧光淬灭封片剂，为用户提供一站式实验解决方案，极大提升实验便利性。其配备的 7 色荧光底物覆盖 480–750 nm 波长范围，可按需自由搭配，实现单张切片 7 重信息的同步获取。同时配套的二抗兼容兔 / 鼠多物种一抗，打破传统种属限制，搭配针对性研发的温和抗体洗脱剂，能在去除抗体的同时保留抗原与荧光信号，循环染色 5–7 轮仍可维持组织结构完整，相较于微波热修复大幅降低样本损伤。作为通用型试剂盒，其适用范围广泛，可适配石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片、类器官等多种组织样本，且依托专业的技术支持与质量保障体系，用户在使用过程中遇到的各类问题均能获得及时有效的解决方案。

酪酰胺信号放大（TSA，Tyramide Signal Amplification）技术是一类基于酶促催化反应的高灵敏度原位检测技术，其核心机制是利用辣根过氧化物酶（HRP）的高效催化活性，对样本中的靶蛋白或核酸分子进行特异性、高密度标记。作为突破传统检测技术灵敏度瓶颈的关键手段，TSA 技术通过独特的信号放大效应，能够在荧光免疫细胞化学（ICC）、免疫组化（IHC）和原位杂交（FISH）等多个核心应用场景中，显著增强靶标相关荧光信号的强度。相较于传统检测方法，该技术可有效捕捉到低丰度靶标 —— 包括样本中微量表达的功能蛋白、稀有细胞表面标志物、低拷贝核酸片段等传统手段难以检出的目标分子，为生命科学研究与临床诊断提供了更精准、更全面的检测解决方案，广泛适配石蜡切片、冷冻组织、细胞样本、类器官等多种样本类型的检测需求。

酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术的问世，为荧光多重染色提供了高效的信号放大解决方案，有效破解了传统技术面临的诸多局限。其核心原理在于，一抗与靶点特异性结合，偶联有辣根过氧化物酶 HRP 的二抗与一抗结合后，向反应体系中引入携带荧光基团的酪胺分子。荧光标记的酪胺盐在 HRP 催化过氧化氢（H2O2）的条件下会产生共价键结合位点，进而引发大量酶促反应。这些反应产物能够与周围蛋白（如色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基所在的蛋白）相结合，在抗原-抗体结合处堆积大量荧光素，使信号强度实现数十倍的提升，即便低丰度靶点也能被精准检测。

2024年抗体市场数据集中排名前100的抗体基于抗体引文分析，为抗体市场提供了独特且量化的全景视图，是抗体研究与应用领域的重要参考。