标记度计算器 · DOL (Degree of Labeling)
标记度 (DOL),有时称为取代度 (DOS),是表征和优化生物偶联物(例如荧光标记的蛋白质)有用的参数。一般来说,DOL 值较低的偶联物往往具有较弱的荧光强度。但是具有非常高 DOL 值(例如DOL >8)的生物偶联物也可能会出现荧光减弱,这通常是由于荧光团猝灭引起。准确的 DOL 值能使研究人员找到给定标记的最佳结合比例,并确保标记工艺的可重复性。对于抗体,一般最佳 DOL 通常在 2 到 10 之间,更精确的值在很大程度上取决于标签和蛋白质的特性。
DOL = [标记物浓度] / [目标分子浓度] — 帮助优化偶联工艺与荧光强度。
本页面工具支持多种常见荧光染料/标签,如有其他需求,请联系我们技术支持。
目标分子 (Target) 蛋白/抗体
蛋白在280nm的摩尔消光系数 (典型抗体~203,000)
蛋白分子量,例如IgG~150 kDa, BSA~66 kDa, 链霉亲和素~52 kDa。其他蛋白点此进行摩尔消光系数及蛋白分子量计算
标记物 (Label / 染料) 扩展库20+
染料在其最大吸收波长处的摩尔消光系数
染料在280nm吸光度占峰值吸光度的比例,扣除对蛋白信号干扰
吸光度测量值 (光程 = 1 cm)
包含蛋白和部分染料的贡献,用于校正后计算蛋白浓度
偶联物在染料最大吸收波长处的吸光度,直接对应标记物浓度
标记度DOL (Degree of Labeling)
—
蛋白浓度 (摩尔): —
蛋白浓度: —
标记物浓度: —
公式: [蛋白摩尔浓度M] = (A₂₈₀ - A_max × CF) / ε_target | [蛋白质量浓度mg/ml] = [蛋白] (mol/L) × 分子量×1000 | [染料摩尔浓度] = A_max / ε_label | DOL = [染料] / [蛋白]
提示:选择预设会自动填入推荐的消光系数与校正因子(可手动覆盖)。若使用自定义蛋白/染料,请根据实际光谱数据修改参数。
DOL 理想范围通常 2~10,过高可能引起自淬灭。校正因子CF准确度影响蛋白浓度计算。
DOL 理想范围通常 2~10,过高可能引起自淬灭。校正因子CF准确度影响蛋白浓度计算。